[发明专利]柯萨奇病毒A7的病毒样颗粒及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了具有免疫原性的柯萨奇病毒A7的病毒样颗粒，所述病毒样颗粒具有SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列的P1蛋白和SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列的3CD蛋白。本发明还公开了所述病毒样颗粒的制备方法。本发明的病毒样颗粒具有高的免疫原性，可用于制备预防手足口病的病毒感染的疫苗，还可作为抗原用于制备免疫检测试剂盒。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及柯萨奇病毒A7的病毒样颗粒及其制备方法和应用。

背景技术

手足口病是由肠道病毒引起的传染病，在亚太地区呈周期性爆发，多数手足口病的患儿一周左右自愈，少数患儿可引起肺部并发症，心肌炎、无菌性脑膜脑炎等并发症，重症患儿病情发展快，短时间内可导致死亡。目前对手足口病缺乏有效治疗药物对症治疗，造成我国及周边国家严重的公共卫生问题。

EV，Enterovirus，肠道病毒，肠道病毒又称肠病毒，是一种主要寄生于肠道的单链正义RNA病毒，属于小RNA病毒科，包括脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒和埃可病毒等，与人类及哺乳动物的传染性疾病有关。肠道病毒在人群中感染主要表现为类流感症状、疱疹性咽峡炎及手足口病等症状。

CA，Coxsackievirus groups A，柯萨奇病毒A组，属于肠道病毒属，根据乳鼠感染的临床症状与组织病理特性分成A、B两组。A组目前包含24种血清型，与人类的手足口疾病主要相关。

目前已报道的可引起手足口病的肠道病毒有20多种(型)，包括肠道病毒71型(Enterovirus 71，EV71)、柯萨奇病毒A组16型(CA16)、CA10、CA6、CA4、CA7和CA14等，以EV71引起的重症居多。目前针对EV71引起的手足口病的疫苗已成功上市销售，对由EV71病毒引起的手足口病起到积极的预防作用，但肠道病毒A组病毒抗体之间没有交叉保护作用。CA7是除EV71和脊髓灰质炎病毒以外与弛缓性麻痹爆发相关的少数肠道病毒之一。

肠道病毒颗粒直径约为20～30nm，呈现20面体对称球形，无包膜。病毒衣壳蛋白内部包裹的一条单链正义RNA全长约7500bp，由一个开放阅读框(open reading frame，ORF)和两端的5’-和3’-非编码区(untranslated region，UTR)组成。ORF编码一个较大的多聚前体蛋白，由P1、P2、P3三个前体蛋白组成，P1编码病毒衣壳的结构蛋白VP1、VP2、VP3和VP4，其中VP1包含主要的中和抗原表位所在的区域，P2、P3编码非结构蛋白，包括2A、2B、2C、3A、3B、3C和3D。肠道病毒家族的前体蛋白的剪切一般为ORF表达的多聚前体蛋白首先裂解为P1、P2、P3，P1经3CD蛋白等的作用继而裂解为各种衣壳蛋白VP0(约35kDa)、VP1(约32kDa)和VP3(约28kDa)，病毒的衣壳蛋白一般具有天然的自我装配能力，组装成病毒颗粒，VP0在核酸存在的情况下进一步裂解为VP2和VP4。肠道病毒一般采用适宜的载体序列同时表达P1和3CD蛋白，不需经过筛选纯培养病毒即可获得具有免疫原性的病毒样颗粒(virus-likeparticles,VLPs)。VLPs不含有病毒的核酸，因此不能自主复制，没有感染性，但其形态与天然状态下的病毒颗粒相同或相似，免疫后可通过和病毒感染相同的途径呈递给免疫细胞，有效地诱导机体的免疫系统产生免疫保护反应。

然而，目前本领域还没有一种有效的针对柯萨奇病毒的理想疫苗。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案。

第一方面，本发明提供一种重组杆状病毒表达载体。

作为本发明的一个具体实施方式，本发明的重组杆状病毒表达载体具有SEQ IDNO.1所示的核苷酸序列和SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，或具有分别与SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列和SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列互补的序列，或具有分别与SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列和SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列具有95％以上同源性的序列。