[发明专利]一种利那洛肽的合成方法

说明书

本发明公开了一种利那洛肽的合成方法，属于药物合成技术领域。所述合成方法包括：固相合成利那洛肽树脂，其中采用C末端含有OPfp酯的半胱氨酸用于固相合成，再脱除保护基和树脂固相载体得到线性利那洛肽；线性利那洛肽溶于质量百分比浓度为2～10％的二甲亚砜水溶液中，制得线性利那洛肽浓度为1～5mg/mL的混合液，再加入相当于线性利那洛肽10～15倍当量的硫酸铵、氢氧化铵或碳酸铵，pH值控制在8.0±0.3，采用随机氧化法形成三对二硫键得到利那洛肽粗品，纯化后制得纯度为99.5％且杂质0.1％的利那洛肽。本发明提供的合成方法工艺操作简单，一步环合即可形成正确的二硫键对，大大提高了生产效率，降低制造成本。

技术领域

本发明涉及药物合成技术领域，具体涉及一种采用液相一步环合制备利那洛肽的方法。

背景技术

利那洛肽(商品名为LINZESS)是一种由Ironwood公司开发的新型的GC-C(肠上皮细胞尿苷酸环化酶C)受体激动剂。它激活肠上皮细胞顶端的GC-C受体，导致细胞内和细胞外环磷酸鸟苷的增加。其作用是增加了氯和碳酸氢盐进入肠腔的分泌，进而导致液体分泌增加和大便加速，用于治疗慢传输型便秘和便秘型肠易激综合征(IBS-C)的成人患者。

利那洛肽由14个氨基酸组成，含有3对二硫键，其序列结构如下：

利那洛肽中三个二硫键的成环反应是该产品合成的难点。专利文献W02019113872A1公开了采用一步树脂环合法合成利那洛肽。这个方法是基于使用N-X-丁二酰亚胺中的一种形式，比如：N-氯丁二酰亚胺、N-溴丁二酰亚胺、N-碘丁二酰亚胺、N-羟基硫代丁二酰亚胺。虽然该方法具有低浓度、树脂环合的优点，但同时去除所有半胱氨酸保护基和一步形成三个二硫桥，会导致反应中出现多个杂质，进而导致纯化变得繁琐。

专利文献CN106831950A公开了采用分步氧化法，分两步合成利那洛肽。第一步先两个二硫键，第二步形成剩余的第三个二硫键。

专利文献CN103626849A公开了采用分步氧化法合成利那洛肽的方法，在单一溶液中借助于三种不同的半胱氨酸保护基如Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Cys(Acm)-OH，Fmoc-Cys(Hmq)-OH进行了反应。然而，在分步氧化法中，半胱氨酸需要三对不同的保护基，这一复杂的操作步骤将导致产率低、成本高。

即使在同一溶液中对半胱氨酸采用两种或三种不同的保护基进行逐步氧化，获得的产率和纯度也较低，且成本较高。

随机氧化法是一步形成三个二硫桥的方法，其优点是该体系对所有六种半胱氨酸只需要一个类似的保护基团，氧化体系也易于操作，但这里的一个问题是可能产生错配异构体。

专利文献CN106167514A采用随机氧化法来合成利那洛肽，在盐酸胍氧化体系的帮助下，用胱氨酸/半胱氨酸一步环合形成了三个二硫桥。但该试剂体系即盐酸胍-胱氨酸/半胱氨酸氧化体系对三个二硫桥的形成并不有效，它会导致一些杂质的产生。

专利文献CN105884864A公开了采用随机氧化法合成利那洛肽，在较浓氧化体系的帮助下形成3个二硫桥。即每1.0g利那洛肽，用50-70mL碳酸铵/DMSO/水溶液与对苯二酚或TCEP一起，反应维持时间为1-2小时。然而，在该体系条件下，会产生更多的杂质，进而使净化变得繁琐。

专利文献CN106008674A公开了随机氧化法合成利那洛肽，采用了以二甲基亚砜/氨水体系为氧化剂，并用HMP-AM树脂制备了线型利那洛肽。但HMP-AM树脂不适合构建14个氨基酸的多肽，用这个方法得到的产物最大纯度仅为98.4％。除此之外，在氧化系统中使用乙腈是不可取的，为进一步纯化带来困难。

专利文献CN102875655B公开了随机氧化法合成利那洛肽。在GSH(谷胱甘肽)/GSSH(氧化谷胱甘肽)氧化体系的辅助下获得利那洛肽的粗品。但该氧化体系不能准确定位三对二硫键的连接位置，导致大量杂质的产生。