[发明专利]一种利那洛肽的合成方法

权利要求书

1.一种利那洛肽的合成方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将Fmoc-Tyr(tBu)-OH偶联到Wang树脂或CTC树脂上，再脱Fmoc保护基得到H-Tyr(tBu)-树脂固相载体；

然后按照SEQ ID NO:1所示氨基酸序列顺序，依次将Fmoc-Cys(Xan)-OPfp、Fmoc-Thr(tBu)-Gly-OH、Fmoc-Cys(Xan)-OPfp、Fmoc-Pro-Ala-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Cys(Xan)-OPfp、Fmoc-Cys(Xan)-OPfp、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Cys(Xan)-OPfp、Boc-Cys(Xan)-OPfp进行延伸偶联，得到利那洛肽树脂；

(2)利用裂解试剂脱除利那洛肽树脂上所有保护基和树脂固相载体，得到线性利那洛肽；裂解试剂为三氟乙酸、乙二硫醇、三异丙基硅烷和水以体积比为92.5：2.5：2.5：2.5混合所得，10～20℃下反应3～4小时；

(3)将线性利那洛肽溶于质量百分比浓度为2％的二甲亚砜水溶液中，制得线性利那洛肽浓度为1～5mg/mL的混合液，再加入相当于线性利那洛肽10～15倍当量的硫酸铵-，用氨水调节反应体系pH值在8.0±0.3，环合反应形成第1、6位Cys的二硫键、第2、10位Cys的二硫键以及第5、13位Cys的二硫键，得到利那洛肽粗品，纯化后制得利那洛肽；

所述纯化分两步进行，第一步：将利那洛肽粗品通过C18反相柱，用含体积比0.1％的乙酸水溶液洗涤，再以含体积比0.5％乙酸和0.05％三氟乙酸的水溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行洗脱，收集目标峰馏分；第二步：将收集的目标峰馏分装入C18反相柱，用含质量百分比0.15％的醋酸铵水溶液洗涤，再以含体积比0.1％的乙酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行洗脱，收集目标产物。

2.如权利要求1所述的利那洛肽的合成方法，其特征在于，步骤(1)中，脱Fmoc保护基为使用10-30％哌啶在DMF、DMSO、N,N-二乙基乙酰胺或NMP的非质子溶剂中裂解Fmoc基团。

3.如权利要求1所述的利那洛肽的合成方法，其特征在于，对于C-末端含酸基的氨基酸，采用肽偶联试剂进行偶联，所述肽偶联试剂为DIC、HBTU、TBTU、PyBoP、HATU、HCTU的任意一种，或者任意一种与DIEA或N-甲基吗啉联用。

4.如权利要求3所述的利那洛肽的合成方法，其特征在于，各Fmoc氨基酸片段和肽偶联试剂的添加量均为树脂取代物的2-4倍当量。

5.如权利要求1所述的利那洛肽的合成方法，其特征在于，步骤(2)中，利那洛肽树脂与裂解试剂的混合比为200g：1L，裂解条件为15±2℃下反应3.5h。

6.如权利要求1所述的利那洛肽的合成方法，其特征在于，步骤(2)中，裂解反应结束后，收集滤液，加入乙醚、二异丙基醚或甲基叔丁基醚，5-10℃下放置以沉淀产物，将沉淀产物过滤，用醚洗涤3-5次并干燥。

7.如权利要求1所述的利那洛肽的合成方法，其特征在于，步骤(3)中，所述混合液中线性利那洛肽浓度为2mg/mL。