[发明专利]一种基于RAA-LFD检测新冠病毒的方法

说明书

本发明公开了一种基于RAA‑LFD检测新冠病毒的方法，包括如下步骤：样本留取；核酸提取；标准质粒构建；以新冠病毒COVID‑19 N基因作为靶基因，分析新冠病毒COVID‑19 N基因的序列特点；使用RAA核酸扩增试剂盒进行RAA反应体系的配制；RAA反应结束后，打开Eppendorf管，吸取扩增产物至一新的Eppendorf管中，做好标记，并稀释50倍，马上进行试纸条检测；利用试剂盒进行RAA扩增和试纸条检测，获得产品的检测下限为1×10¹拷贝/μL；以超纯水作为阴性对照，以1×10⁰拷贝/μL、1×10¹拷贝/μL、1×10²拷贝/μL、重组质粒为模板，进行3次平行试验。本发明检测灵敏度高，操作简便快速，无需专门设备，结果准确可以满足临床样本的检测，特别适合资源匮乏地区或机场、学校等单位的流动应急检测。

技术领域

本发明涉及新冠病毒检测技术领域，特别涉及一种基于RAA-LFD检测新 冠病毒的方法。

背景技术

新型冠状病毒-严重急性呼吸综合征冠状病毒2(Severe acute respiratorysyndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2)是一种先前未在人类中发现的病原体， 能在人与人之间迅速传播。COVID-19尚无有效治疗药物，目前的手段主要是 隔离治疗和对症支持。因此加强COVID-19实验室病原学快速检测则是 COVID-19有效监测和诊断的关键。

核酸检测技术是最直接、最本质的病原学证据，是确诊SARS-CoV-2感 染的“金标准”，优于其他临床表现、临床体征及CT检测等经验判读。目前 用于检测SARS-CoV-2的常规方法是采用实时荧光RT-PCR(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction)，该方法能够从鼻腔或咽拭子、痰液 或支气管肺泡灌洗液中检测SARS-CoV-2。然而，实时荧光RT-qPCR成本高 昂，花费昂贵(3-4h)，需要大量的实验室基础设施和培训，妨碍了它们在资源有限的领域中的使用(例如在医疗设施落后地区或者港口、机场或车站等 人流密集的防控一线的快速检测)。此外，长时间的过程增加了SARS-CoV-2 进一步传播的风险，并阻碍了对所有潜在接触的广泛检测；高通量测序技术 (High-throughput sequencing)又称“下一代”测序技术(Next-generation sequencing technology,NGS)，是对包括新冠病毒在内的所有病原体以及病原 体的全基因序列进行完整测序，并与已知病毒序列进行全序列比对分析来诊 断SARS-CoV-2是否存在。尽管NGS具有很多优势，包括可以对病毒进化来 源、致病病理机制和病毒变异情况进行研究与分析，但NGS技术的自身限制 (耗时更长、需要昂贵的二代测序设备和严格的操作环境)，注定了高通量 测序技术也只能作为实时荧光RT-PCR的补充，更不适合作为一项应急的快速 筛查方法。因此，无论是上述的那种方法，均不适合在条件相对贫乏的地区 或单位进行即时检验(point-of-care testing，POCT)。