[发明专利]一种从发酵液中提取纽莫康定B0的方法与应用

说明书

本发明涉及微生物发酵提取技术领域，具体公开了一种从发酵液中提取纽莫康定B0的方法与应用。本发明的从发酵液中提取纽莫康定B0的方法，其将纽莫康定B0的发酵液经酸化固液分离后，采用体积百分比为80％‑85％的低级醇进行醇萃取，将得到的萃取液在pH值为3‑3.5的条件下进行油泥分离后，降低经油泥分离后的萃取液中的所述低级醇的浓度，得到纽莫康定B0的粗品。本发明方法简单稳定可控，能够缩短生产周期，节约大量的有机溶媒，减少大量的固体废弃物，从而节约了能源降低了生产成本。

技术领域

本发明涉及微生物发酵提取技术领域，具体地说，涉及一种从发酵液中提取纽莫康定B0的方法与应用。

背景技术

纽莫康定(Pneumocandins)是由Zalerion arboricola产生的一类天然抗真菌药物，由于它对多种念珠菌、地方性真菌、曲霉及卡氏肺囊虫均有效，因而越来越受到人们的关注。其主要作用机理是能够非竞争性的抑制真菌细胞壁中葡聚糖合成酶的活性，进而引起真菌细胞壁的裂解以及细胞内外渗透压的改变从而将真菌细胞彻底杀死。

纽莫康定B0(Pneumocandin B0)是合成抗真菌药物卡泊芬净(Caspofungin)的中间体，杂质太多会影响后面合成卡泊芬净，且在分离工艺上不能成功的应用到大规模生产上。随着对卡泊芬净单杂的要求(0.1％)越来越高，那么其合成的中间体纽莫康定B0的纯度要求也变得更高。纽莫康定B0的纯度对后续产品的的合成收率以及成本有很大的关联。

目前纽莫康定B0通行的提取纯化方法是大孔树脂吸附解析和硅胶层析进行纯化，其需要大量的有机溶媒并且将产生很多的固体废弃物。随着环保意识的逐渐加强，在纽莫康定B0提纯过程中，如何减少有机溶媒的使用量和减少固废是当务之急。

因此，需要提供一种新的有效方法来解决现有技术中的问题。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种可节约大量的有机溶媒，并减少大量的固体废弃物的从发酵液中提取纽莫康定B0的方法。

为了实现该目的，本发明的技术方案如下：

一种从发酵液中提取纽莫康定B0的方法，其是将纽莫康定B0的发酵液经酸化固液分离后，采用体积百分比为80％-85％的低级醇进行萃取，将得到的萃取液在pH值为3-3.5的条件下进行油泥分离后，降低经油泥分离后的萃取液中的所述低级醇的浓度，得到纽莫康定B0的粗品。

本发明发现将纽莫康定B0的发酵液以特定浓度低级醇萃取后的萃取液，在特定酸性条件下缓慢搅拌，可使其中的油脂和色素聚集析出，并实现有效的分离纯化效果。

优选，纽莫康定B0的发酵液中，纽莫康定B0的色谱纯度为45％-50％。

作为一个示例，本发明的纽莫康定B0的发酵液以如下方法制备得到：

(1)斜面种子培养：

斜面种子培养基：PDA培养基。

斜面种子培养条件：温度23-25℃，培养时间11-13天。

(2)种子罐培养：

种子罐培养基：葡萄糖1.5-2.5％，黄豆饼粉0.8-1.2％，棉籽饼粉0.8-1.2％，玉米浆干粉0.4-0.6％，KH₂PO₄ 0.15-0.25％，pH值7.0-7.2。

种子罐培养条件：罐温23-25℃，搅拌转速190-210rpm，空气流量0.8-1.2vvm，培养时间2.5-3.5天。

(3)发酵罐培养：