[发明专利]一种母乳α-淀粉酶活性检测方法

说明书

本发明公开一种母乳α‑淀粉酶活性检测方法，包括如下步骤：将新鲜母乳样本与饱和硫酸铵溶液混合，充分震荡摇匀后，离心取清液，然后运用碘‑淀粉比色法实现母乳α‑淀粉酶活性测定。本方法能在实现澄清母乳样本的同时，不损伤α‑淀粉酶活性的目的，且不用大比例稀释待测母乳，使得分光光度法能够准确检测母乳α‑淀粉酶活性值。

技术领域

本发明涉及一种母乳α-淀粉酶活性检测方法，尤其是对于母乳中含量极低的活性成分α-淀粉酶进行检测的前处理方法。

背景技术

基于天然母乳的乳浊液特性，不论是天然底物淀粉检测方法，还是分子组成确定底物(如还原性麦芽糖)的方法，均不能基于分光光度法有效检测母乳α-淀粉酶活性，这就要求在检测之前对母乳进行样本前处理。

目前国、内外前处理方法有首先对母乳样本高速离心去脂，并在特定的pH值下通过特定试剂(如磷酸盐缓冲溶液等)进行稀释一定比例，制成待测母乳样本等方法。存在不能完全澄清母乳，基于分光光度法进行活性检测会存在较大误差等问题。

发明内容

发明目的：为解决现有技术中的技术问题，本发明提出一种母乳α-淀粉酶活性检测方法，尤其是对于母乳中含量极低的活性成分α-淀粉酶进行检测的前处理方法。

技术方案：为实现上述目的，本发明的技术方案如下：一种母乳α-淀粉酶活性检测方法，其特征在于，包括如下步骤：将新鲜母乳样本与饱和硫酸铵溶液混合，充分震荡摇匀后，离心取清液，然后运用碘-淀粉比色法实现母乳α-淀粉酶活性测定。

优选地，新鲜母乳与饱和硫酸铵溶液的体积比为1:1～1:5，进一步优选地，两者体积比为1:1。

震荡条件为：涡旋仪上震荡1～5min，在一个优选的实施方案中，在涡旋仪上震荡1min。

优选地，离心条件为离心2～10min，设定转速为2000～10000r/min，在一个优选的实施方案中，离心条件为离心5min，转速5000r/min。

在一个优选的实施方案中，按照如下方法进行测定：

(1)吸取1ml新鲜母乳于4ml规格塑料试管中，再加入1ml饱和硫酸铵溶液；

(2)将该塑料试管放于涡旋仪上震荡1min，充分混匀；

(3)将塑料试管放入离心机内离心5分钟，设定转速为5000r/min；

(4)取离心后清液100μl于玻璃比色皿中，其中，所述玻璃比色皿中含2ml浓度为0.8mg/ml淀粉溶液；

(5)在避光条件下滴入碘/碘化钾溶液，反应5～20min，优选地，在37℃保温(避光)条件下反应5～20min后，滴入浓度为50mmol/L的碘/碘化钾溶液，该溶液与玻璃比色皿中含有淀粉溶液的体积比为1：10～1：50，更优选地，比例为1：20；

(6)迅速放入可见分光光度仪中，读取吸光度值Abs；

(7)将吸光度值Abs代入计算公式求取母乳α-淀粉酶活性值。

其中，以加入2ml浓度为0.8mg/ml淀粉溶液计，母乳α-淀粉酶活性值AMY的计算公式为(单位U/L)：

其中，代表测定管淀粉的水解程度，大小范围为0～1，含义为在实验条件下，100μl离心清液中的淀粉酶在15分钟内水解0.4mg淀粉，则其活性为800个单位。

有益效果：与现有技术相比，本发明具有如下优点：

(1)本发明意外的发现，采用饱和硫酸铵溶液作为反应试剂，能在实现澄清母乳样本的同时，不损伤α-淀粉酶活性的目的，且不用大比例稀释待测母乳(母乳α-淀粉酶活性极低)，使得分光光度法能够准确检测母乳α-淀粉酶活性值；