[发明专利]一种功能核酸荧光传感器及其在铅离子检测中的应用

权利要求书

1.一种功能核酸荧光传感器，其特征在于，包括脱氧核酶、核酶底物、分子信标、DNA聚合酶、限制性内切酶、多聚核苷酸激酶和dTNPs；

所述脱氧核酶序列如SEQ No.1所示；

所述核酶底物序列如SEQ No.2所示；

所述分子信标序列如SEQ No.3所示，其中5′端被荧光基团标记、3′端被荧光猝灭基团标记。

2.如权利要求1所述的功能核酸荧光传感器，其特征在于，DNA聚合酶为Bsm DNA聚合酶。

3.如权利要求1所述的功能核酸荧光传感器，其特征在于，限制性内切酶为Nb.Bpu10I。

4.如权利要求1所述的功能核酸荧光传感器，其特征在于，多聚核苷酸激酶为T4 PNK。

5.如权利要求1所述的功能核酸荧光传感器，其特征在于，dTNPs为dATP、dCTP、dGTP、dTTP的等摩尔混合物。

6.如权利要求1-5所述的功能核酸荧光传感器在铅离子检测中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，包括如下步骤：

(1)制备脱氧核酶缓冲液、核酶底物缓冲液、分子信标缓冲液

将脱氧核酶、核酶底物、分子信标溶解于缓冲液中，得到脱氧核酶缓冲液、核酶底物缓冲液和分子信标缓冲液；

(2)绘制标准曲线

①将脱氧核酶缓冲液和核酶底物缓冲液混合，加入分子信标缓冲液、DNA聚合酶、限制性内切酶、多聚核苷酸激酶、dTNPs溶液以及浓度已知的铅离子标准溶液，混合均匀；

②加入缓冲液将步骤①得到的混合液定容；

③将步骤②得到的混合反应体系放置于恒温孵育器中孵育；

④将步骤③得到的混合反应体系进行荧光检测，记录该铅离子标准溶液对应的荧光强度峰值；

⑤使用一系列浓度已知的铅离子标准溶液代替步骤①中的铅离子标准溶液，重复步骤①②③④的操作，得到一系列铅离子标准溶液的荧光强度峰值，以铅离子标准溶液的铅离子浓度对数值为横坐标，以铅离子标准溶液的荧光强度峰值为纵坐标绘制标准曲线；

(3)待测样品检测

将步骤(2)①中的铅离子标准溶液替换为待测样品，重复步骤(2)①②③④的操作得到待测样品的荧光强度峰值，将待测样品的荧光强度峰值带入标准曲线的回归方程中，计算出待测样品中铅离子的浓度。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，步骤(1)和步骤(2)②所用的缓冲液为BsmR缓冲液。

9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，步骤(2)③为将步骤②得到的混合反应体系放置于恒温孵育器中37℃下孵育40min，然后在80℃下孵育15min。

10.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，步骤(2)④中测定荧光强度时，采用的激发波长与发射波长根据所述荧光基团的激发波长与发射波长进行确定。