[发明专利]一种利用重组酵母进行高支链淀粉酒精发酵的方法

权利要求书

1.一种利用重组酵母进行高支链淀粉酒精发酵的方法，其特征在于：以20%的高支链淀粉为原料，以酿酒酵母CCTCC NO: 2011219为菌种进行酒精发酵；淀粉液化液DE值控制在5%~6%，发酵48h；当0-16h发酵温度控制在38℃，16h后发酵温度控制在32℃；以制备1L发酵液为例，具体步骤如下：

（1）在2L大烧杯中加入高支链淀粉200g，加水至总体积为0.9L，用HCl或NaOH调整pH至6.0-6.5，加中温淀粉酶200U，搅拌混合；

（2）步骤（1）所得装有淀粉悬液的烧杯放入沸水浴中加热，持续快速搅拌，加热同时检测淀粉悬液温度，当温度达到65 ℃时淀粉开始糊化，淀粉液变得粘稠，迅速将烧杯取出放入70℃的水浴锅中保温并搅拌，保温8-12min；

（3）取出烧杯，加入盐酸调整pH至3.8-4.2，在沸水浴中加热，维持30min灭活淀粉酶；

（4）检测淀粉液DE值，用NaOH调整pH至5.8-6.2；再添加中温淀粉酶10U，在65℃保温，间隔10min检测还原糖计算DE值；当DE值达到5%-6%时加入玉米浆干粉15g，尿素0.5-2g，混匀，再用盐酸调整pH至4.0-4.3，加入糖化酶0.1mL共计10000U；转入发酵罐中；

（5）转入预先培养成熟的酵母种子液100mL，根据实际体积适当补水至总体积为1 L；加入糖化酶后需要在1 h内开始发酵过程。

2.根据权利要求1所述利用重组酵母进行高支链淀粉酒精发酵的方法，其特征在于所述酵母种子液制备方法如下：

（1）制备发酵液，液化时控制液化液DE值在18%-22%；

（2）在500mL三角瓶中加入步骤（1）制备所得发酵液100mL，接种斜面培养活化的酿酒酵母CCTCC NO: 2011219一环，用铝箔封口，摇瓶机转速控制在60-100r/min，以保证菌体悬浮；培养36h，以酒精含量达到2%为种子成熟的标志；

（3）酒精发酵：发酵温度控制在38℃，搅拌转速65r/min，打开发酵罐出气口，不开进气，依靠发酵产生的CO₂维持罐压在0.1 MPa，维持发酵16 h；16 h后改变发酵温度为32℃，整个发酵过程间隔12h检测酒精变化。

3.根据权利要求2所述利用重组酵母进行高支链淀粉酒精发酵的方法，其特征在于：所述活化菌种用的斜面培养基具体组成为：酵母粉1%，蛋白胨2%，葡萄糖2%，琼脂粉1.5%，自然pH。