[发明专利]用于检测COVID-19病毒的RT-RAA引物对和诊断试剂盒

说明书

一种用于检测COVID‑19病毒的RT‑RAA引物对，其上游引物包括SEQ No 1所示的核酸序列，下游引物包括SEQ No 2所示的核酸序列。采用本发明提供的引物对建立的检测方法，操作简单且不易交叉感染，反应快速，结果准确可靠，适用于COVID‑19的快速检测，可用于疫情早诊断、早隔离、降低感染率以及控制疫情蔓延。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其是涉及一种RAA引物对，用于检测COVID-19病毒，及其诊断试剂盒。

背景技术

SARS-CoV-2是一种大型阳性单链核糖核酸(RNA)病毒，由其引起的肺部疾病于2020年2月11日被世界卫生组织(WHO)命名为COVID-19。SARS-CoV-2最主要的传播途径有接触传播和飞沫传播。截止2020年6月1日，全球已确诊的COVID-19病例超过605万例，而全球死亡人数超过37万人。对于此次传播性强、传染速度快、致死率高的新型冠状病毒SARS-CoV-2感染的肺炎，针对性的疫苗与药物尚在研发中，早发现、早隔离是目前控制传染源，阻断传播途径的最有效措施。因此，尽快建立高效灵敏、快速简易的临床诊断体系，是当前疫情防治工作的重中之重。

目前国内外已建立的COVID-19检测可分为两大类。第一类包括检测个体由于暴露于病毒而产生的抗体或检测被感染个体中的抗原蛋白的血清学检测。第二类包括使用基于聚合酶链反应(PCR)的技术或与核酸杂交相关的策略检测SARS-CoV-2病毒RNA的分子诊断。然而血清学检测需要患者体内的特异性抗体含量达到一定程度，且缺乏专门的商业试剂，故在疾病早期较难发挥作用。基于实时逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的COVID-19分子诊断已在全球范围内被广泛使用。然而，目前其诊断分析并十分不可靠，因为它们仍然会遗漏某些感染病例。此外，它们只能在装备精良的中央实验室由高技能的分析人员进行分析操作。

综上所述，迫切需要发展一种适用于医疗点或需求点以及在低资源环境下的高准确度的、专一的、用户友好的、快速的、便携的即时检测设备，用于COVID-19的现场检测。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种基于RAA检测COVID-19病毒的引物对，提高检测COVID-19病毒核酸的灵敏度。

本发明的另一个目的在于提供一种基于RAA检测COVID-19病毒的引物对，提高检测COVID-19病毒核酸的特异性。

本发明的再一个目的在于提供一种诊断试剂，改善COVID-19病毒核酸检测界面的用户友好性，使检测结果可视化，易于识别。

本发明所称的RAA即重组酶介导等温扩增技术。

一种基于RAA检测COVID-19病毒的引物对，其上游引物包括SEQ No 1所示的核酸序列，下游引物包括SEQ No 2所示的核酸序列。

在上游引物的5’端结合荧光标记，如：但不限于Hex、VIC、Cy5或FAM等。

在下游引物的5’端结合耦合标记，如：生物素，其与亲和素耦合。

本发明提供的基于RAA检测COVID-19病毒的引物对，还需要与其它试剂相组合，形成试剂盒，应用于COVID-19病毒的核酸检测。比如：分子拥挤试剂(如：但不限于20wt％分子量为35，000聚乙二醇(PEG))，核酸扩增启动剂(如：但不限于280nM醋酸镁)和反应干粉酶试剂等。

实施核酸检测的扩增反应条件为37℃～42℃，时间为10分钟～25分钟。

一种扩增方法，以本发明的引物对样本实施核酸扩增，其包括以下步骤：

将分子拥挤试剂、核酸扩增启动剂、反应干粉酶制剂和扩增引物对共混后，置入37～42℃恒温箱，扩增10～30分钟后，结束反应。