[发明专利]一种新型冠状病毒2019-nCoV数字PCR超敏检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种新型冠状病毒2019-nCoV数字PCR超敏检测试剂盒，所述新型冠状病毒2019-nCoV包括ORF1ab基因、N基因和E基因，其特征在于：所述试剂盒包括数字PCR反应液A、数字PCR反应液B、数字PCR引物混合液C和阴性对照溶液D，所述数字PCR引物混合液C包括用于检测新型冠状病毒新型冠状病毒2019-nCoV的ORF1ab基因、N基因和E基因的正向引物、反向引物和引物探针，引物探针上设有至少一个荧光基团。

2.如权利要求1所述的新型冠状病毒2019-nCoV数字PCR超敏检测试剂盒，其特征在于：所述检测新型冠状病毒新型冠状病毒2019-nCoV的ORF1ab基因用的正向引物、反向引物和引物探针分别为ORF1ab-F、ORF1ab-R和ORF1ab-P，所述ORF1ab-F的正向引物序列为5’-CCCTGTGGGTTTTACACTTAA-3’，所述ORF1ab-F的反向引物序列为5’-ACGATTGTGCATCAGCTGA-3’，所述ORF1ab-P的探针序列为5’-ROX-CCGTCTGCGGTATGTGGAAAGGTTATGG-BHQ2-3’，其中，ROX为荧光基团，BHQ2为淬灭基团。

3.如权利要求1所述的新型冠状病毒2019-nCoV数字PCR超敏检测试剂盒，其特征在于：所述检测新型冠状病毒新型冠状病毒2019-nCoV的ORF1ab基因的N基因的正向引物、反向引物和引物探针分别为N-F、N-R、N-P，所述N-F的引物序列为5’-GGGGAACTTCTCCTGCTAGAAT-3’，所述N-R的引物序列为5’-CAGACATTTTGCTCTCAAGCTG-3’，所述N-P的探针序列为5’-FAM-TTGCTGCTGCTTGACAGATT-BHQ1-3’，其中，FAM为荧光基团，BHQ1为淬灭基团。

4.如权利要求1所述的新型冠状病毒2019-nCoV数字PCR超敏检测试剂盒，其特征在于：所述检测新型冠状病毒新型冠状病毒2019-nCoV的E基因的F基因的正向引物、反向引物和引物探针分别为E-F、E-R、E-P，所述E-F的引物序列为5’-ACAGGTACGTTAATAGTTAATAGCGT-3’，所述E-R的引物序列为5’-ATATTGCAGCAGTACGCACACA-3’，所述E-P的探针序列为5’-CY5-ACACTAGCCATCCTTACTGCGCTTCG-BHQ2-3’，其中CY5为荧光基团，BHQ2为淬灭基团。

5.如权利要求1所述的新型冠状病毒2019-nCoV数字PCR超敏检测试剂盒，其特征在于：所述正向引物和反向引物的浓度为600nM，所述引物探针的浓度为200nM。

6.如权利要求1至5中任一项所述的新型冠状病毒2019-nCoV数字PCR超敏检测试剂盒，其特征在于：所述数字PCR反应液A包括PCR缓冲液、Mg2+、dNTPs、逆转录酶、热启动DNA酶，所述数字PCR反应液B为DTT溶液,所述阴性对照溶液D为生理盐水，所述PCR缓冲液为Tris-Hcl缓冲液。