[发明专利]一种高通量快速测定稻米酶解量的方法

说明书

本发明提供一种高通量快速测定稻米酶解量的方法，至少包括如下步骤：(1)预处理：将米粉和乙酸钠缓冲液置于96孔深孔板中，预热后进行离心；所述米粉是指粉状稻米；(2)体外消化反应：使用多通道移液器将消化缓冲液加入到步骤(1)的96孔深孔板中，计时并搅拌，每隔一定时间进行取样，将样本置于96孔PCR板中，向96孔PCR板中加入酒精结束反应，获得各时间点的反应样本；(3)酶解量测定。本发明具有操作简单，成本较低，可快速高效地模拟米饭体内的消化情况，从而获得稻米体内的消化特性。

技术领域

本发明属于医疗卫生、食品健康领域，涉及一种高通量快速测定稻米酶解量的方法。

背景技术

水稻(Oryza sativa L.)作为世界最重要的粮食作物之一,为人类活动提供大量的能量，但是糖尿病人过量摄入可能会导致生命危险，此外，普通人过量摄入淀粉也会导致肥胖从而引起其他并发症。通过提高稻米中的抗性淀粉含量可有效地降低糖尿病人过量食用产生的风险，同时抗性淀粉作为一种膳食纤维可以改善肠道中益生菌具有保健作用。抗性淀粉(Resistant Starch,Rs)是指在健康者小肠中不被吸收的淀粉及淀粉的降解物。

提高稻米中的慢消化淀粉和抗性淀粉的含量对改善水稻的营养品质从而满足当下人们需求显得尤为重要。育种家们一直致力于培育具抗性淀粉含量高的水稻品种。虽然已经取得了一些进展，但是，没有突破性的进展，其中原因之一是表型分析。抗性淀粉测量方法过程繁琐、效率低、可控性差、成本高。这一直制约着培育高抗性淀粉含量的水稻新品种的发展。

目前测量消化的方法主要分为体内测定法和体外测定法体内测定方法以人体为试验对象，成本较高，对人体也有一定影响，作为常规测定方法不方便也不现实。目前，国内外研究人员主要注重体外测定方法的研究，其基本原理大多使用酶模拟体内环境水解淀粉，测定稻米的酶解量。文献报道的测定方法主要有：Englyst法、Guraya法以及它们的改进法。前人在稻米消化方法上已经取得了非常大的进步但是还存在一些不足之处，难予实现大批量动态的测量，成本较高，实验繁琐等。

发明内容

为克服目前在稻米消化特性分析方面的不足，本发明提供了一种高通量快速测定稻米酶解量方法，它具有操作简单、耗时少、高通量和成本低廉等优势。

为了实现上述目的以及其他相关目的，本发明采用如下技术方案：

一种高通量快速测定稻米酶解量的方法，所述方法至少包括如下步骤：

(1)预处理：将米粉和乙酸钠缓冲液置于96孔深孔板中，预热后进行离心；所述米粉是指粉状稻米；

(2)体外消化反应：使用多通道移液器将消化缓冲液加入到步骤(1)的96孔深孔板中，计时并搅拌，每隔一定时间进行取样，将样本置于96孔PCR板中，向96孔PCR板中加入酒精结束反应，获得各时间点的反应样本；

(3)米粉的酶解量测定：使用多通道移液器将各时间点的反应样本移至96孔酶标板中，测定各时间点的反应样本的葡萄糖浓度，根据公式(I)获得每次取样时的稻米酶解量；

酶解量＝葡萄糖浓度*0.9/样本质量*100％ (I)。

本发明还提供前述的高通量快速测定稻米酶解量的方法用于模拟稻米体内的消化情况中的用途。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

本发明具有操作简单，成本较低，可快速高效地模拟米饭体内的消化情况，从而获得稻米体内的消化特性。现有技术中的消化方法是参照megazyme公司试剂盒方法操作的，本发明所述的方法与现有方法在消化的方式，反应的体系，反应的容器，终止反应的方法等都存在差异。本发明为快速分析稻米消化特性提供了有效的技术支持，能够显著提高筛选有利人体健康稻米的效率。

附图说明