[发明专利]一种蝴蝶兰软腐病抗性鉴定方法

说明书

本发明公开了提供一种蝴蝶兰软腐病抗性鉴定方法，剪取蝴蝶兰品种中下部叶片，用酒精将叶片及叶柄伤口擦拭一遍，自然晾干。将病原菌株接种于NA培养液，用无菌水配制成细菌悬浮液。用无菌大头针在叶片中央密集轻刺，在针刺处滴细菌悬浮液，放入磁盘中保湿密封，黑暗培养。当叶片出现水渍状病斑时，观察并记录叶片发病情况。以平均防效进行分级，评价品种的抗感特性。

技术领域

本发明涉及一种农作物病虫害抗性鉴定方法，具体的说就是一种蝴蝶兰软腐病抗性鉴定方法，属农业植保领域。

背景技术

蝴蝶兰软腐病(phalaenopsis soft rot disease)，由迪克氏细菌Dickeyadieffenbachiae引起，为蝴蝶兰的主要病害之一，分布广泛且全国各蝴蝶兰生产区均有发生。发病后，病原菌分泌果胶酶，溶解细胞壁中的果胶质，使组织软腐，且蔓延迅速，造成严重的经挤损失。抗病品种的选育是控制该病害的主要手段。但是目前国内外尚未有关于蝴蝶兰批准抗性鉴定的方法，因此，发明准确评价品种的抗性的方法显得尤其重要。

发明内容

鉴于现有技术的不足，本发明旨在于提供一种蝴蝶兰软腐病抗性鉴定方法。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种蝴蝶兰软腐病抗性鉴定方法，所述方法包括以下步骤：

S1病原菌分离和准备，获取蝴蝶兰软腐病样品，按常规消毒，再用无菌刀将病健交接处的组织切成薄片移到NA培养基上培养，经分离纯化，并经柯赫氏法则验证确定；于32℃下在NA平板上培养，获病原菌纯培养；将病原菌株接种于NA培养液，在32℃转速150r/min培养36h，用无菌水配制成10⁶-10⁷CFU/mL的细菌悬浮液；

S2将灭菌后的滤纸置于培养皿中，喷无菌水至滤纸湿润后备用；

S3品种准备，选28个蝴蝶兰品种，每品种准备5片叶子，大小直径为50mm-70mm，清洗晾干后用质量浓度75％的酒精消毒，用高感软腐病GD1做对照；将消毒后的蝴蝶兰叶片分别置于保湿好的消毒平板中；

S4接种鉴定，用无菌大头针在叶片中央密集轻刺5下，在针刺处滴0.2mL步骤S1获得的细菌悬浮液，每个处理4次重复，每个重复5片叶；

S5调查评价，放入磁盘中保湿密封，30℃黑暗培养。当叶片出现水渍状病斑时，每24h观察并记录叶片发病情况；

S6按分级标准进行分级并计算病情指数，根据病情指数进行品种的抗感特性评价.

优选的，蝴蝶兰品种软腐病病抗性水平按照以下标准进行确定：

高抗：病情指数≤20；

抗病：20＜病情指数≤40；

中抗：40＜病情指数≤60；

感病：60＜病情指数≤80；

高感：80＜病情指数；

优选的，分级标准是：

0级，针刺处无水渍状病斑；1级，针刺处见水渍状病斑，病斑不扩散到针刺范围外0.2cm距离外；

2级，病斑扩散到针刺范围外0.2cm距离外，同时病斑面积≤25％叶片面积；

3级，25％叶片面积＜病斑面积≤50％叶片面积；

4级，50％叶片面积＜病斑面积≤75％叶片面积；

5级，75％叶片面积＜病斑面积。

优选的，病情指数计算公式为：