[发明专利]一种T淋巴细胞冻存液及其制备方法和细胞冻存方法

说明书

本发明公开了一种T淋巴细胞冻存液及其制备方法和冻存方法。该T淋巴细胞冻存液包括：二甲基亚砜、无血清细胞培养基、血清替代物，其中，所述血清替代物，按重量份数计，包括如下组分：氨基酸、人血清白蛋白、无机盐、维生素、二十二碳六烯酸、二十碳五烯酸、胰岛素、丙酮酸钠、谷胱甘肽。本发明提供的T淋巴细胞冻存液的成分简单，制备工艺简单，成本低，易于产业化生产；本发明提供的冻存液不影响细胞的特性和细胞的增殖能力，保持了T淋巴细胞高复苏活率，能够较好的保持细胞冻存复苏后的增殖速度，可以满足大规模冻存细胞的需求，有助于细胞冻存技术的快速应用和推广；本发明提供的T淋巴细胞冻存方法具有操作简单、快速的优势。

技术领域

本发明涉及细胞生物学技术领域，特别涉及一种T淋巴细胞冻存液及其制备方法和细胞冻存方法。

背景技术

T淋巴细胞来源于骨髓的多能干细胞，成熟的T细胞经血流分布至外周免疫器官的胸腺依赖区定居，并可经淋巴管、外周血和组织液等进行再循环，发挥细胞免疫及免疫调节等功能。目前干细胞和免疫细胞技术广泛应用，干细胞和免疫细胞储存是整个细胞产业链中的重要环节。而T淋巴细胞细胞冻存需要使用保护剂，防止细胞在冻存和复苏过程中受到冰晶损伤、脱水和吸水损伤。目前使用较多的冻存液配方是由二甲基亚砜、自体血浆和细胞培养基按照1:4:5的重量比配制而成的，这种冻存液虽然可以维持细胞的增殖速度，但是由于自体血浆取材有限，当大量细胞扩增冻存时，该配方无法满足细胞冻存所需冻存液体积。

发明内容

本发明目的在于提供一种T淋巴细胞冻存液及其制备方法和细胞冻存方法，以解决上述技术问题。

为了解决上述技术问题，本发明的技术方案为：

第一方面，本发明提供的一种T淋巴细胞冻存液，按重量份数计，包括：二甲基亚砜5～15份、无血清细胞培养基40～60份、血清替代物35～45份，其中，所述血清替代物，按重量份数计，包括如下组分：氨基酸20～80份、人血清白蛋白200～500份、无机盐50～200份、维生素3～30份、二十二碳六烯酸1～10份、二十碳五烯酸1～10份、胰岛素5～20份、丙酮酸钠40～200份、谷胱甘肽1～2份。

优选的，所述T淋巴细胞冻存液，按重量份数计，包括：二甲基亚砜10份、无血清细胞培养基50份、血清替代物40份。

优选的，所述无血清细胞培养基为ALyS505N-0无血清细胞培养基。

优选的，所述维生素选自维生素D₂、维生素K₂、维生素K₃中的一种或多种。

进一步优选的，所述维生素由维生素D₂、维生素K₂、维生素K₃按照1:1:1的重量比混合而成。

优选的，所述血清替代物，按重量份数计，包括如下组分：氨基酸50～60份、人血清白蛋白300～350份、无机盐80～120份、维生素9～15份、二十二碳六烯酸3～8份、二十碳五烯酸3～8份、胰岛素10～15份、丙酮酸钠100～150份、谷胱甘肽1～2份。

第二方面，本发明提供的一种如第一方面所述的T淋巴细胞冻存液的制备方法，包括如下步骤：

(1)将氨基酸、人血清白蛋白、无机盐、维生素D₂、维生素K₂、维生素K₃、二十二碳六烯酸、二十碳五烯酸、胰岛素、丙酮酸钠、谷胱甘肽混合制成血清替代物；

(2)将二甲基亚砜、无血清细胞培养基和所得的血清替代物混合制成冻存液。

第三方面，本发明提供的一种T淋巴细胞冻存方法，包括如下步骤：

(1)取如第一方面所述的T淋巴细胞冻存液，