[发明专利]一种T淋巴细胞冻存液及其制备方法和细胞冻存方法

权利要求书

1.一种T淋巴细胞冻存液，其特征在于，按重量份数计，包括：二甲基亚砜5～15份、无血清细胞培养基40～60份、血清替代物35～45份，其中，所述血清替代物，按重量份数计，包括如下组分：氨基酸20～80份、人血清白蛋白200～500份、无机盐50～200份、维生素3～30份、二十二碳六烯酸1～10份、二十碳五烯酸1～10份、胰岛素5～20份、丙酮酸钠40～200份、谷胱甘肽1～2份。

2.根据权利要求1所述的T淋巴细胞冻存液，其特征在于，所述T淋巴细胞冻存液，按重量份数计，包括：二甲基亚砜10份、无血清细胞培养基50份、血清替代物40份。

3.根据权利要求1所述的T淋巴细胞冻存液，其特征在于，所述无血清细胞培养基为ALyS505N-0无血清细胞培养基。

4.根据权利要求1所述的T淋巴细胞冻存液，其特征在于，所述维生素选自维生素D₂、维生素K₂、维生素K₃中的一种或多种。

5.根据权利要求4所述的T淋巴细胞冻存液，其特征在于，所述维生素由维生素D₂、维生素K₂、维生素K₃按照1:1:1的重量比混合而成。

6.根据权利要求1所述的T淋巴细胞冻存液，其特征在于，所述血清替代物，按重量份数计，包括如下组分：氨基酸50～60份、人血清白蛋白300～350份、无机盐80～120份、维生素9～15份、二十二碳六烯酸3～8份、二十碳五烯酸3～8份、胰岛素10～15份、丙酮酸钠100～150份、谷胱甘肽1～2份。

7.一种如权利要求1～6中任一项所述的T淋巴细胞冻存液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将氨基酸、人血清白蛋白、无机盐、维生素D₂、维生素K₂、维生素K₃、二十二碳六烯酸、二十碳五烯酸、胰岛素、丙酮酸钠、谷胱甘肽混合制成血清替代物；

(2)将二甲基亚砜、无血清细胞培养基和所得的血清替代物混合制成冻存液。

8.一种T淋巴细胞冻存方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)取如权利要求1～6中任一项所述的T淋巴细胞冻存液；

(2)从培养瓶中取出T淋巴细胞悬液，采用血球技术板进行计数，将细胞悬液离心，弃去上清后，加入所述T淋巴细胞冻存液中，再转移至冻存管；

(3)将冻存管放入程序降温仪中，降温后冻存；

(4)将冻存后转移至液氮罐内存放。

9.根据权利要求8所述的T淋巴细胞冻存方法，其特征在于，所述步骤(2)中离心的转速为1000～2000r/min，时间为3～10min。

10.根据权利要求8所述的T淋巴细胞冻存方法，其特征在于，所述步骤(2)中冻存管中T淋巴细胞的浓度为0.5～2×10⁸个/mL。