[发明专利]一种能够用于检测NPC1L1突变基因分型的试剂及其应用

说明书

本发明公开一种能够用于检测NPC1L1突变基因分型的试剂及其应用，所述检测NPC1L1突变基因分型的试剂，包括针对NPC1L1 g1679 CG(rs2072183)基因位点的引物和探针，所述探针为TaqMan探针。所述试剂盒包含上述试剂，并使用TaqMan探针法qPCR全自动检测。本方案具有检测方法操作简单，检测结果灵敏性、强准确度高等优点。在NPC1L1 g1679 CG(rs2072183)基因位点的基因型中，CC型为对胆固醇吸收抑制剂敏感的族群从而可作为医生用药的参考依据，指导治疗方式和用药。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种能够用于检测NPC1L1突变基因分型的试剂及其应用。

背景技术

胆固醇是生物膜的重要组成成分，也是合成甾醇类激素和胆汁酸的前体。摄入过多的胆固醇会导致很多疾病，包括心脑血管疾病等。高胆固醇血症是动脉粥样硬化心血管疾病(包括冠心病、缺血性卒中、短暂脑缺血发作、动脉粥样硬化性主动脉疾病以及外周动脉疾病)最为重要的危险因素之一，降低胆固醇将有效降低相关心血管疾病的发病率和死亡率。应用他汀类药物降低胆固醇水平被多项心血管疾病防治指南推荐为动脉粥样硬化心血管疾病一级预防和二级预防的核心策略。但在临床实践中，许多患者接受他汀治疗后其胆固醇水平仍不能达到目标值。

肠黏膜上Niemann-Pick C1-like 1(NPC1L1)转运蛋白是负责转运肠道中胆固醇吸收的关键跨膜蛋白。选择性胆固醇吸收抑制剂可通过抑制NPC1L1蛋白功能，减少胆固醇吸收，降低血清胆固醇水平。选择性胆固醇吸收抑制剂为更安全、有效地减低血清胆固醇提供了新选择。IMPROVEIT研究表明，ACS患者在辛伐他汀基础上加用依折麦布能进一步降低心血管事件。

海泽麦布，是近来正在进行临床研究的一种新型胆固醇吸收抑制剂。NPC1L1蛋白是海泽麦布的主要药效靶点。NPC1L1编码基因存在丰富的遗传变异。其中，NPC1L1 g1679 CG(rs2072183)是中国人群中较为常见的突变位点。研究已经证实，等位基因g1679 C(rs2072183)的携带者服用依折麦布后低密度脂蛋白降低更为显著(P＝0.028)。此外，NPC1L1基因突变对他汀类药物的反应也存在较大影响。目前研究表明，等位基因g1679 G(rs2072183)的携带者对他汀类药物的反应性明显降低。但尚未有通过检测该基因突变预测患者对海泽麦布等降脂药物疗效的报道，尤其是区分不同突变基因分型药效的报道。

目前，针对基因变异的检测方法有聚合酶链反应-限制性片段多态性(polymerasechain reaction linked restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP)、直接测序法、qPCR TaqMan探针法等。其中，PCR-RFLP法存在操作繁琐，电泳操作难以标准化，并且易产生PCR产物气溶胶造成环境污染和假阳性结果的缺陷，逐渐被临床淘汰。直接测序法是最为准确的基因分型方法，但存在：操作复杂，测序周期长，测序结果需要专门软件解读的缺陷，不便临床使用。而TaqMan探针法相较于传统的PCR-RFLP法优势在于：第一，TaqMan荧光探针特异性强，可识别靶序列中单个碱基的错配、缺失或突变；第二，TaqMan探针灵敏度高、重复性好，检测灵敏度可达2×10³拷贝；第三，TaqMan探针省时、方便、高通量，可在一个试管内做到将PCR扩增、荧光探针杂交、检测一体化；第四，TaqMan探针避免污染、减少误差、安全性好。

综合考虑灵敏度、特异性、稳定性和操作自动化程度、通量高低等因素，基于TaqMan探针法qPCR全自动检测方法作为NPC1L1基因分型检测方法存在巨大潜力，将有望成为最快捷，最常见，最经济的方法之一。而由于NPC1L1基因存在多种突变方式，因此，若能识别出不同的基因分型将能够更好地辅助预测胆固醇吸收抑制剂的效果。

发明内容

本发明所要解决的第一个技术问题是：提供一种能够用于检测NPC1L1突变基因分型的试剂。