[发明专利]利用酶标仪测定病毒和抗体结合动力学参数的方法

说明书

本发明提供了一种利用酶标仪测定病毒和抗体结合动力学参数的方法，包括：第一步骤：准备无底孔板以及特异性检测芯片；第二步骤：将特异性检测芯片覆盖待测样品捕获抗体，以便对待测样品的量进行特异性检测；第三步骤：配制待测样品浓度标准样品；第四步骤：向待测样品标准样品浓度中加入待测样品检测抗体，并用酶标仪记录特定波长下的动力曲线；第五步骤：利用采集到的动力曲线数据，计算出结合动力学参数。

技术领域

本发明涉及检测技术领域，具体涉及一种以新型冠状病毒(SARS-COV-2)为例利用酶标仪测定病毒和抗体结合动力学参数的方法。

背景技术

分子相互作用动力学的测量在药物发现，遗传筛查和临床诊断中越来越重要，因为动态结合信息可以提高对疾病的认识和可以为治疗提供新思路。表面等离子体共振(SPR)传感器，如商业Biacore SPR生物传感器系统，能够实时监测动力学生物分子相互作用，无需标记，不受大量背景的影响。由于商业Biacore SPR生物传感器系统属于传统SPR设备，所以其需要特制的设备，专人的操作，使得购买或使用该生物传感器系统需要大量的金钱。

冠状病毒直径约80～120nm，在电镜下可以观察到它们的表面有类似日冕的放射状突起，就像王冠一样，故而被命名为冠状病毒。新型冠状病毒(SARS-COV-2)是2019年在人体中发现的冠状病毒新毒株。该病毒症状一般为发热、乏力、干咳、逐渐出现呼吸困难。因此，尤其对于SARS-COV-2的分子间动力学参数的测定，希望能够解决生物传感器系统检测成本较高的问题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术中存在上述缺陷，提供一种以SARS-COV-2为例利用酶标仪测定分子间动力学参数的方法，以解决商业Biacore SPR生物传感器系统检测成本较高的问题。

根据本发明，提供了一种利用酶标仪测定病毒和抗体结合动力学参数的方法包括：

第一步骤：准备无底孔板以及特异性检测芯片；

第二步骤：将特异性检测芯片覆盖待测样品捕获抗体，以便对待测样品蛋白的量进行特异性检测；

第三步骤：配制待测样品浓度标准样品；

第四步骤：向待测样品标准样品浓度中加入待测样品检测抗体，并用酶标仪记录特定波长下的动力曲线；

第五步骤：利用采集到的动力曲线数据，计算出动力学参数。

优选地，所述待测样品是SARS-COV-2。

优选地，特定波长为565nm和705nm。

优选地，动力曲线数据是光学密度数据。

优选地，特异性检测芯片采用复制成形工艺制作，其中，利用激光干涉光刻在石英基板上制作锥形纳米柱图案，然后将紫外光固化聚合物均匀散布在模具上，顶部以聚对苯二甲酸乙二醇酯支撑；用紫外光进行固化处理，然后将聚对苯二甲酸乙二醇酯基板连同周期性纳米孔道图案从模具上剥除；通过电子束蒸发沉积形成一个钛粘附层和一个黄金层，以实现等离激元器件成形；然后利用射频等离子体溅射沉积二氧化钛谐振腔层，而后通过钛粘附层和顶部黄金层的电子束蒸发形成纳米谐振腔。

优选地，所述钛黏附层、黄金层和二氧化钛谐振腔层的厚度分别是16nm、220nm和180nm。

优选地，第五步骤将采集到的动力曲线数据进行回归拟合分析以计算出动力学参数。