[发明专利]利用酶标仪测定病毒和抗体结合动力学参数的方法

权利要求书

1.一种利用酶标仪测定病毒和抗体结合动力学参数的方法，其特征在于包括：

第一步骤：准备无底孔板以及特异性检测芯片；

第二步骤：将特异性检测芯片覆盖待测样品捕获抗体，以便对待测样品蛋白的量进行特异性检测；

第三步骤：配制待测样品浓度标准样品；

第四步骤：向待测样品标准样品浓度中加入待测样品检测抗体，并用酶标仪记录特定波长下的动力曲线；

第五步骤：利用采集到的动力曲线数据，计算出动力学参数。

2.根据权利要求1所述的利用酶标仪测定分子间动力学参数的方法，其特征在于，所述待测样品是SARS-COV-2。

3.根据权利要求1或2所述的利用酶标仪测定分子间动力学参数的方法，其特征在于，特定波长为565nm和705nm。

4.根据权利要求1或2所述的利用酶标仪测定分子间动力学参数的方法，其特征在于，动力曲线数据是光学密度数据。

5.根据权利要求1或2所述的利用酶标仪测定病毒和抗体结合动力学参数的方法，其特征在于，特异性检测芯片采用复制成形工艺制作，其中，利用激光干涉光刻在石英基板上制作锥形纳米柱图案，然后将紫外光固化聚合物均匀散布在模具上，顶部以聚对苯二甲酸乙二醇酯支撑；用紫外光进行固化处理，然后将聚对苯二甲酸乙二醇酯基板连同周期性纳米孔道图案从模具上剥除；通过电子束蒸发沉积形成一个钛粘附层和一个黄金层，以实现等离激元器件成形；然后利用射频等离子体溅射沉积二氧化钛谐振腔层，而后通过钛粘附层和顶部黄金层的电子束蒸发形成纳米谐振腔。

6.根据权利要求5所述的利用酶标仪测定病毒和抗体结合动力学参数的方法，其特征在于，所述钛黏附层、黄金层和二氧化钛谐振腔层的厚度分别是16nm、220nm和180nm。

7.根据权利要求1或2所述的利用酶标仪测定病毒和抗体结合动力学参数的方法，其特征在于，第五步骤将采集到的动力曲线数据进行回归拟合分析以计算出动力学参数。

8.根据权利要求1或2所述的利用酶标仪测定病毒和抗体结合动力学参数的方法，其特征在于，特异性检测芯片覆盖SARS-COV-2捕获抗体包括：在室温条件下将特异性检测芯片置于11-巯基十一烷酸溶液中，清洗后吹干；加入1-乙烷基-3-3-二甲基氨丙基碳化二亚胺和N-羟基丁二酰亚胺的1:1混合液中孵育；孵育结束后放入单克隆抗SARS-COV-2抗体内孵育，清洗后吹干；加入牛血清白蛋白阻断液中室温孵育，去除牛血清白蛋白阻断液并加入乙醇胺溶液室温孵育，以覆盖未反应的NHS酯；清洗吹干后放置于干燥环境中。

9.根据权利要求1或2所述的利用酶标仪测定病毒和抗体结合动力学参数的方法，其特征在于，配制SARS-COV-2浓度标准样品包括：采用250μg/ml的SARS-COV-2蛋白溶液为母液，稀释配制为不同浓度梯度的SARS-COV-2标准样品溶液；稀释底液为PBS缓冲液。