[发明专利]一种检测COVID-19病毒的引物组、探针组和试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种检测COVID‑19病毒的引物组，包括上游引物和下游引物，引物组对样本要求较低，扩增特异性强，大大提高了临床检测结果的灵敏度。本发明还公开了一种检测COVID‑19病毒的探针组，包括一号探针和二号探针，可分别与目标单链DNA通过碱基互补配对结合，并被磁珠捕获，可实现放大光学信号、定量检测的目的；本发明还公开了一种检测COVID‑19病毒的试剂盒，采用上述引物组和探针组，结合磁珠捕获和光学信号放大技术，具有高灵敏度、高特异性的特点，操作简单，成本低，可以广泛应用于基层医疗机构；上述试剂盒可用于检测COVID‑19病毒，检测结果稳定可靠，适用场景广泛，具有很大的市场前景。

技术领域

本发明涉及微生物检测技术领域，尤其涉及一种检测COVID-19病毒的引物组、探针组和试剂盒及其应用。

背景技术

新型冠状病毒于2020年1月12日由世界卫生组织命名为2019-nCoV，2020 年2月11日由世界卫生组织正式命名为COVID-19。复旦大学张永振教授领导科研团队破译其基因序列，并于网站上公开发表。石正丽团队发现2019-nCoV 全基因组与SARS-CoV的序列同源性达76％，通过对其保守的7个非结构蛋白进行对比，确认2019-nCoV和SARS-CoV同属于冠状病毒β属，病毒spike糖蛋白(S)通过与宿主细胞受体血管紧张素转化酶II(ACE-2)结合而侵入机体。冠状病毒作为一个大的病毒家族，是具外膜的单股正链RNA病毒；冠状病毒有包膜，包膜上存在棘突(spike)，不同冠状病毒的棘突有明显的差异。该病毒已知可引起感冒、中东呼吸综合征(MERS)及严重急性呼吸综合征(SARS)等，传染性大，危害严重。

目前常用的检测新冠病毒COVID-19的方法是实时荧光RT-PCR法和测序法，实时荧光RT-PCR方法检测新冠病毒COVID-19已经用在了临床，但是其对样本要求较高，存在假阴性的情况，也需要专业的PCR实验室才可以开展，对操作人员的技能要求较高，不利于大范围内推广。而基因测序的方法，需要专门的测序仪器，测序的时间周期较长，测序数据量大，也需要专业的生物信息分析人员对序列信息进行分析，成本较高，不利于临床应用。因此，新冠病毒 COVID-19的临床检测，迫切需要一种特异性高，灵敏度强、操作相对简单的低成本的试剂盒。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的之一在于提供一种检测COVID-19 病毒的引物组，对样本要求较低，扩增特异性强，大大提高了临床检测结果的灵敏度；

本发明的目的之二在于提供一种检测COVID-19病毒的探针组，探针的序列可与目标单链DNA形成互补配对结合，并被磁珠捕获，可实现放大光学信号、定量检测的目的；

本发明的目的之三在于提供一种检测COVID-19病毒的试剂盒，采用上述引物组和探针组，结合磁珠捕获和光学信号放大技术，具有高灵敏度、高特异性的特点，可以实现病毒的定量检测；成本低廉，也可以广泛应用于基层医疗机构；

本发明的目的之四在于提供一种上述试剂盒在检测COVID-19病毒上的应用，操作简单，成本低，检测结果稳定可靠，适用场景广泛，具有很大的市场前景。

本发明的目的之一采用如下技术方案实现：

一种检测COVID-19病毒的引物组，包括上游引物和下游引物，所述上游引物和下游引物的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.2所示。

优选地，所述下游引物的5’端结合有Phos磷酸基团。

上述引物组是根据COVID-19病毒的特异性序列片段设计的，该序列片段的特异性可达99.9％以上，可大大提高临床检测结果的灵敏度。

本发明的目的之二采用如下技术方案实现：