[发明专利]一种检测COVID-19病毒的引物组、探针组和试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种检测COVID-19病毒的引物组，其特征在于，包括上游引物和下游引物，所述上游引物和下游引物的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.2所示。

2.根据权利要求1所述的检测COVID-19病毒的引物组，其特征在于，所述下游引物的5’端结合有Phos磷酸基团。

3.一种检测COVID-19病毒的探针组，其特征在于，包括一号探针和二号探针，所述一号探针和二号探针分别与目标单链DNA通过碱基互补配对结合；所述一号探针和二号探针的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.3-SEQ ID NO.4所示。

4.根据权利要求3所述检测COVID-19病毒的探针组，其特征在于，所述一号探针的3’端结合有生物素；所述二号探针的5’端结合有氨基。

5.一种检测COVID-19病毒的试剂盒，其特征在于，包括：权利要求1或2所述的检测COVID-19病毒的引物组、权利要求3或4所述的检测COVID-19病毒的探针组、发光标记物、磁珠、清洗液、激发液。

6.根据权利要求5所述的检测COVID-19病毒的试剂盒，其特征在于，所述引物组中的上游引物、下游引物的体积比为1:(10-30)。

7.根据权利要求5所述的检测COVID-19病毒的试剂盒，其特征在于，所述发光标记物用于标记探针组中的一号探针；所述发光标记物为吖啶酯。

8.根据权利要求5所述的检测COVID-19病毒的试剂盒，其特征在于，所述清洗液包括：0.8-1.2vol.％的1M Tris溶液、0.8-1.2vol.％的5％土温-20，余量为超纯水；所述激发液包括0.2M的NaOH、0.06％的过氧化氢；所述磁珠上包被有羟基；所述磁珠的粒径为50nm-100um、密度为1.05-3.38g/m³。

9.权利要求5所述的检测COVID-19病毒的试剂盒在检测COVID-19病毒上的应用，其特征在于，包括以下步骤：

(1)提取待测样本的RNA，经逆转录后，通过不对称PCR扩增制备目标单链DNA；

(2)将发光标记物与一号探针混合进行反应，制备发光标记物-一号探针复合物；将所述目标单链DNA与所述发光标记物-一号探针复合物混合，加入Binding Buffer，50-60℃反应25-35min后，置于冰上冷却，得到一次杂交产物；

(3)将磁珠与结合有氨基的二号探针混合进行反应，得到磁珠-二号探针复合物；将所述一次杂交产物与所述磁珠-二号探针复合物混合，加入核酸连接酶，50-60℃反应8-12min后，置于冰上冷却，得到二次杂交产物；

(4)清洗所述二次杂交产物，然后加入激发液，利用采集光信号的仪器捕获光信号强度。

10.根据权利要求9所述的检测COVID-19病毒的试剂盒在检测COVID-19病毒上的应用，其特征在于，步骤(2)中，所述目标单链DNA与发光标记物-一号探针复合物的质量比为1:(2.8-10)；

步骤(3)中，所述一次杂交产物与磁珠-二号探针复合物的体积比为1：(2.1-11)。