[发明专利]反义RNA ch-MYC-AS1表达检测的引物及试剂盒

说明书

本发明涉及一种反义RNA ch‑MYC‑AS1表达检测的引物及试剂盒，属于分子生物学领域。所述引物包括链特异性RT引物和荧光定量PCR检测引物；其中链特异性RT引物的序列如SEQ ID NO.8所示；荧光定量PCR检测引物的序列如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示。本研究发明还提供了ch‑MYC‑AS1表达检测试剂盒，为ch‑MYC‑AS1表达规律分析提供了方法和基础。

技术领域

本发明涉及一种原癌基因c-myc衍生的反义RNA ch-MYC-AS1表达检测的引物及试剂盒，属于病毒学、表观遗传学、肿瘤学和新型抗肿瘤和病毒药物研究领域。

背景技术

原癌基因c-myc最先被鉴定为禽白血病病毒诱导淋巴瘤的常见整合位点，并在肿瘤发生中扮演着关键角色。在禽白血病病毒易感品系鸡中，由于“强”病毒启动子的插入，前病毒整合入c-myc原癌基因后由病毒启动子LTR驱动c-myc基因高表达从而诱发法氏囊淋巴瘤。禽白血病病毒感染引起的致癌蛋白MYC的异常高表达影响了鸡法氏囊组织的基因表达谱，这是导致淋巴瘤发生的重要原因。而在禽白血病病毒抗性品系鸡中，机体通过减少病毒启动子LTR驱动的c-myc基因高表达，从而对前病毒整合入c-myc原癌基因后诱导的淋巴瘤产生了抗性。因此，通过降低致癌蛋白MYC表达是一种抵抗禽白血病病毒诱导淋巴瘤发生的有效策略。

对反义RNA的研究中，我们意外发现不仅抑癌基因存在反义RNA，许多癌基因也存在反义RNA。在癌细胞中，这些反义RNA处于沉默(Silencing)状态，DNA甲基化抑制剂AZA可明显激活这些反义RNA表达，且反义RNA与对应的正义癌基因呈显著负相关关系。因此，癌细胞中的一些癌基因可能受其反义RNA的调控，这些癌基因的激活可能归因于它们反义RNA的表观遗传沉默，致使癌基因去抑制，从而导致癌基因的激活。这种全新的癌基因的致癌表观遗传学机制，不仅对基础研究和临床医学研究均具重大意义，也对抗肿瘤病毒研究具有重要意义。癌基因衍生的反义RNA在抑制肿瘤细胞和肿瘤病毒增殖中的作用及其表观遗传学机制将逐渐被阐明，有望成为新型的抗肿瘤和病毒药物。

发明内容

本发明通过双链RNA文库测序在鸡2号染色体上鉴定出一条原癌基因c-myc衍生的反义RNA，命名为ch-MYC-AS1。研究表明，ch-MYC-AS1可以抑制原癌基因c-myc表达并抑制J亚群禽白血病病毒增殖。因此，进一步了解ch-MYC-AS1在不同组织细胞的表达规律显得尤为重要。本发明的目的是提供一种能检测ch-MYC-AS1表达的检测引物及试剂盒。

本发明的目的是这样实现的，一种反义RNA ch-MYC-AS1表达检测的引物，其特征在于，包括链特异性RT引物和荧光定量PCR检测引物；所述链特异性RT引物的序列如SEQ IDNO.8所示；所述荧光定量PCR检测引物的序列如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示；其中：

SEQ ID NO.8为：5’-CAGAGGAGAACGACAAGAGGCGAAC-3’；

SEQ ID NO.9为：5’-CACAGACTAATCGCAGAGA-3’；

SEQ ID NO.10为：5’-GTGATGTCCAAGAGTTCCTA-3’。

一种反义RNAch-MYC-AS1表达检测试剂盒，包括链特异性RT引物、逆转录试剂、荧光定量PCR检测引物和定量PCR检测试剂；其特征在于，

所述链特异性RT引物的序列如SEQ ID NO.8所示；所述荧光定量PCR检测引物的序列如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示；其中：

SEQ ID NO.8为：5’-CAGAGGAGAACGACAAGAGGCGAAC-3’；

SEQ ID NO.9为：5’-CACAGACTAATCGCAGAGA-3’；