[发明专利]长链非编码RNA MYC-AS1表达检测的引物及试剂盒

说明书

本发明属于分子生物学领域，具体涉及一种长链非编码RNA MYC‑AS1表达检测的引物及试剂盒。所述引物包括链特异性RT引物和荧光定量PCR检测引物；其中链特异性RT引物的序列如SEQ ID NO.8所示；荧光定量PCR检测引物的序列如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示。本研究发明还提供了MYC‑AS1表达检测试剂盒，为MYC‑AS1表达规律分析提供了方法和基础，在临床医学中可用于检测肿瘤样品癌基因的表达情况。

技术领域

本发明涉及一种长链非编码RNA MYC-AS1表达检测的引物及试剂盒，属于表观遗传学、肿瘤学和新型抗肿瘤药物研究领域。

背景技术

肿瘤的发生归因于多种内在因素，如遗传突变，表观遗传变异以及代谢异常等。普遍认为，主要有两类基因与肿瘤的发生密切相关，即癌基因和抑癌基因。正常细胞中，癌基因和抑癌基因表达保持一定的平衡比例。遗传和表观遗传突变均能引起癌基因和抑癌基因表达异常，促使正常细胞转化成癌细胞。

虽然已知遗传突变与癌症发生有关，但越来越多的证据表明，表观遗传异常也与癌症的发生、发展和转移密切相关。抑癌基因表观遗传沉默的分子机制已被充分阐明。癌基因在癌细胞中的异常激活，除了报道与遗传突变有关外，至今未有关于表观遗传机制的报道。抑癌基因表观遗传沉默的发现，导致表观遗传药物引入临床治疗。如5-氮-2’-脱氧胞苷(5-Aza-2’-deoxycytidine，AZA)及其类似物5-阿扎胞苷(5-Azacytidine)作为DNA甲基化抑制剂用于白血病的临床治疗以及一些实体肿瘤的临床治疗研究。然而DNA甲基化抑制剂的应用也引起了一些困惑。由于该表观遗传药物的非特异性，AZA在激活抑癌基因的同时，是否也会激活癌基因或癌相关基因。因此，进一步揭示表观遗传药物DNA甲基化抑制剂抑癌机制是癌症研究的另一个重要科学问题。

对反义RNA的研究中，我们意外发现不仅抑癌基因存在反义RNA，许多癌基因也存在反义RNA。在癌细胞中，这些反义RNA处于沉默(Silencing)状态，DNA甲基化抑制剂AZA可明显激活这些反义RNA表达，且反义RNA与对应的正义癌基因呈显著负相关关系。因此，癌细胞中的一些癌基因可能受其反义RNA的调控，这些癌基因的激活可能归因于它们反义RNA的表观遗传沉默，致使癌基因去抑制(Derepression)，从而导致癌基因的激活。这种全新的癌基因的致癌表观遗传学机制，对基础研究和临床医学研究均具重大意义。癌基因衍生的反义RNA在抑制肿瘤细胞增殖中的作用及其表观遗传学机制将逐渐被阐明，有望成为新型的抗肿瘤药物。

发明内容

本发明通过双链RNA文库测序在人8号染色体上鉴定出一条原癌基因c-myc衍生的反义长链非编码RNA，命名为MYC-AS1。研究表明，MYC-AS1可以抑制原癌基因c-myc表达并抑制肿瘤细胞增殖。因此，进一步了解MYC-AS1在不同肿瘤组织的表达规律显得尤为重要。本发明的目的是提供一种长链非编码RNAMYC-AS1表达检测的引物及试剂盒。

本发明的目的是这样实现的，一种长链非编码RNA MYC-AS1表达检测的引物，其特征在于，包括链特异性RT引物和荧光定量PCR检测引物；所述链特异性RT引物的序列如SEQID NO.8所示；所述荧光定量PCR检测引物的序列如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示；其中：

SEQ ID NO.8为：5′-GAGACCTTTCTAACGTATTCATGCCTTGT-3′；

SEQ ID NO.9为：5′-TTCCTCATCTTCTTGTTCCT-3′；

SEQ ID NO.10为：5′-CTAACGTATTCATGCCTTGT-3′。