[发明专利]一种高效利用葡萄糖合成肌醇的大肠杆菌重组菌及其构建方法与应用

权利要求书

1.一种构建产肌醇的大肠杆菌重组菌的方法，包括如下步骤：将肌醇-3-磷酸合成酶基因和肌醇单磷酸酶基因导入宿主菌，得到产肌醇的大肠杆菌重组菌；所述宿主菌为将突变型大肠杆菌SG104基因组中的葡萄糖-6-磷酸异构酶基因敲除后得到的突变型大肠杆菌；

所述肌醇-3-磷酸合成酶基因编码序列表中序列2所示的蛋白质；

所述肌醇单磷酸酶基因编码序列表中序列3所示的蛋白质；

所述突变型大肠杆菌SG104为将大肠杆菌BW25113基因组中的D-葡萄糖PTS通透酶基因（ptsG）替换为葡糖激酶基因（glk），且将丙酮酸氧化酶基因（poxB）替换为乙酰辅酶A合成酶基因（acs），且将半乳糖操纵子的调节子基因（galR）替换为运动单胞菌来源的D-乳糖转运蛋白基因（zglf）后得到的大肠杆菌突变体，其基因型为BW25113ΔptsG::glkΔgalR::zglfΔpoxB::acs。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述肌醇-3-磷酸合成酶基因为下述b1）或b2）所示的DNA分子：

b1）序列表中序列1所示的DNA分子；

b2）与b1）所示的DNA分子具有90%以上同一性且编码所述肌醇-3-磷酸合成酶的DNA分子。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述肌醇单磷酸酶基因为下述c1）或c2）所示的DNA分子：

c1）序列表中序列4所示的DNA分子；

c2）与c1）所示的DNA分子具有90%以上同一性且编码所述肌醇单磷酸酶的DNA分子。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述葡萄糖-6-磷酸异构酶基因编码序列表中序列5所示的蛋白质。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述葡萄糖-6-磷酸异构酶基因为下述d1）或d2）所示的DNA分子：

d1）序列表中序列6所示的DNA分子；

d2）与d1）所示的DNA分子具有90%以上同一性且编码所述葡萄糖-6-磷酸异构酶的DNA分子。

6.按照权利要求1-5任一所述的方法构建得到的产肌醇的大肠杆菌重组菌。

7.权利要求6所述的产肌醇的大肠杆菌重组菌在生产肌醇中的应用。

8.一种生产肌醇的方法，包括如下步骤：将权利要求6所述的产肌醇的大肠杆菌重组菌经阿拉伯糖诱导培养得到诱导后重组菌，用所述诱导后重组菌催化葡萄糖反应，得到肌醇。