[发明专利]一种阳离子化柞蚕丝素蛋白/腺病毒复合物、制备方法及其应用

权利要求书

1.一种阳离子化柞蚕丝素蛋白/腺病毒复合物，其特征在于：阳离子化柞蚕丝素蛋白以静电吸附作用涂层至腺病毒表面，所述复合物的粒径为315～448 nm，复合物的表面Zeta电位为-7.2～-0.1 mV。

2.根据权利要求1所述的一种阳离子化柞蚕丝素蛋白/腺病毒复合物，其特征在于：所述的腺病毒携带生长抑制因子4基因、白细胞介素-24基因、血管内皮生长因子165基因、血管生成素1基因中的一种或两种基因。

3.一种权利要求1所述的阳离子化柞蚕丝素蛋白/腺病毒复合物的制备方法，将柞蚕丝脱胶、溶解、透析后得到再生柞蚕丝素蛋白溶液，其特征在于再进行如下步骤的加工：

（1）将分子量为1.8 kD的聚乙烯亚胺溶解于三蒸水中，配制成浓度为0.5～8 mg/mL的聚乙烯亚胺溶液；将生柞蚕丝素蛋白溶液用三蒸水配制成浓度为10 mg/mL，在冰浴中平衡20～30分钟；

（2）按柞蚕丝素蛋白溶液与聚乙烯亚胺溶液体积比为10:1，向柞蚕丝素蛋白溶液中逐滴加入聚乙烯亚胺溶液，缓慢搅拌，用0.1 mol/L的4-吗啉乙磺酸调节溶液的pH值至7.8～8.0，再加入占柞蚕丝素蛋白质量20%的1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，继续缓慢搅拌，冰浴中反应12～15小时；反应产物经截留分子量3.5 kD的透析袋在温度为0～4 °C的三蒸水中透析后，再经离心超滤处理，得到阳离子化柞蚕丝素蛋白溶液，阳离子化柞蚕丝素蛋白的表面Zeta电位为+2.4～+12.1 mV；

（3）将步骤（2）制备的阳离子化柞蚕丝素蛋白溶液用三蒸水配制成浓度10～150 μg/mL；腺病毒用磷酸盐缓冲溶液稀释至效价(1～2)×10⁷ pfu/mL；按体积比1:3～3:1，将腺病毒与阳离子化柞蚕丝素蛋白混合均匀，涡旋处理1分钟，室温静置30～45分钟，得到阳离子化柞蚕丝素蛋白/腺病毒复合物。

4.根据权利要求3所述的阳离子化柞蚕丝素蛋白/腺病毒复合物的制备方法，其特征在于：步骤（2）所述的离心超滤处理，用截留分子量3 kD的超滤管在温度为0～4 °C、转速7500rpm的条件下离心超滤30分钟。

5.根据权利要求3所述的阳离子化柞蚕丝素蛋白/腺病毒复合物的制备方法，其特征在于：所述的腺病毒携带生长抑制因子4基因、白细胞介素-24基因、血管内皮生长因子165基因、血管生成素1基因中的一种或两种基因。

6.权利要求1所述的阳离子化柞蚕丝素蛋白/腺病毒复合物的应用，其特征在于：复合物特异性感染靶细胞，所述靶细胞为对细胞膜表面过表达整合素α_vβ₃和/或α_vβ₅细胞。

7.根据权利要求6所述的阳离子化柞蚕丝素蛋白/腺病毒复合物的应用，其特征在于：所述的靶细胞包括肺癌细胞、肝癌细胞、血管内皮细胞。