[发明专利]一种检测MLL-AF4融合基因的方法

说明书

本发明公开了一种检测MLL‑AF4融合基因的方法，按照先后顺序依次包括以下步骤：步骤一：样本DNA的获取；步骤二：PCR反应液的配置，用于扩增MLL‑AF4融合基因的引物为：F：5’‑CCGCCCAAGTATCCCTGTAAAAC‑3’；R：3’‑TCGTTATGTATGCGGATCATGTCG‑5’；步骤三：目的条带扩增：以待测样本的DNA为模板，通过设计的引物扩增需要的DNA片段；步骤四：目的DNA回收：对上述PCR反应液进行1％琼脂糖凝胶电泳，回收目的条带；步骤五：对上述步骤中DNA片段进行纯化处理；步骤六：对纯化后的DNA进行转化；步骤七：测序，判断是否为MLL‑AF4融合基因。该检测MLL‑AF4融合基因的方法设计了适用于PCR扩增的引物，在检测的过程中具有很高的特异性、准确定和灵敏度，且更加快速和高效的扩增出目的条带，且具有可重复性。

技术领域

本发明属于生检测技术领域，具体涉及一种检测MLL-AF4融合基因的方法。

背景技术

MLL(mixed lineage leukemia)基因异常是急性白血病中一种十分常见的染色体异常，大多数发生MLL基因异常的急性白血病的预后很差，其中由t(4；11)(q21；q23)易位而形成的MLL-AF4融合基因是急性淋巴细胞白血病中第二大常见的染色体异常,多数患者对常规化疗耐药，即使做异基因造血干细胞移植也容易复发，是一个独立的预后不良因素。

当前国内外广泛使用的分子生物学检测MLL-AF4融合基因的方法中，荧光原位杂交技术(FISH)虽然结果较为直观，但只能进行定性检测且操作复杂，需要荧光显微镜等大型仪器设备和病理医生的诊断意见，对检测机构的要求较严格，不利于临床样本的快速检出。传统的固相生物芯片(Biochip)或基因芯片技术存在着可重复性差、灵敏度不够好以及操作繁琐，成本高的突出弱点。因此我们需要一款新型的检测MLL-AF4融合基因的方法来解决上述问题，满足人们的需求。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测MLL-AF4融合基因的方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种检测MLL-AF4融合基因的方法，按照先后顺序依次包括以下步骤：

步骤一：样本DNA的获取：通过提取核酸的试剂对样本进行处理，获得待测样本的DNA；

步骤二：PCR反应液的配置：分为阳性对照、样本和阴性对照三管，每个管中的反应体系均为20μL，且用于扩增MLL-AF4融合基因的引物为：

F：5’-CCGCCCAAGTATCCCTGTAAAAC-3’；

R：3’-TCGTTATGTATGCGGATCATGTCG-5’；

步骤三：目的条带扩增：以待测样本的DNA为模板，通过设计的引物扩增需要的DNA片段；

步骤四：目的DNA回收：对上述PCR反应液进行1％琼脂糖凝胶电泳，回收目的条带；

步骤五：对上述步骤中DNA片段进行纯化处理；

步骤六：对纯化后的DNA进行转化；

步骤七：测序，判断是否为MLL-AF4融合基因。

优选的，所述步骤二中引物序列的浓度为700-800nM。

优选的，所述步骤三中将配好的试剂通过PCR仪中来扩增目的条带，其中PCR仪反应参数为：94℃，3min；进入循环程序，94℃，3s；55℃，45s；72℃，30s，循环次数为30次；72℃，10min。

优选的，所述步骤一中样本为人和动物组织、新鲜植物组织或者为血液。

优选的，所述阳性对照管中样本DNA为MLL-AF4融合基因溶液，且浓度为500拷贝/μL。