[发明专利]一种菠萝泛菌引起的玉米细菌性条纹病的鉴定方法

说明书

本发明公开一种菠萝泛菌引起的玉米细菌性条纹病的鉴定方法，涉及作物抗病育种技术领域。该方法包括以下步骤：培育玉米苗；病原菌扩繁；病原菌接种；抗性鉴定。本发明接种利用注射器的针头沿着玉米叶片的叶脉划线，制造伤口，协助病原菌入侵，并模拟发病的环境，使菠萝泛菌在玉米叶片成功发病。本发明的鉴定方法操作简单，可在室内完成，重复性好，效率高；且不受季节、外部环境的影响，不但保证了病原菌的数量与生长状态，做到了精准接种、鉴定，而且可在短时间内对玉米材料进行抗性鉴定，大大缩短了鉴定时间，有助于玉米自交系对细菌性条纹病的快速鉴定，应用价值大。

技术领域

本发明涉及作物抗病育种技术领域，特别涉及一种菠萝泛菌引起的玉米细菌性条纹病的鉴定方法。

背景技术

甜玉米起源美洲，是玉米种属中的一个亚种，受一个或多个胚乳淀粉合成途径中的天然隐性突变基因控制。甜玉米兼具粮、果、蔬特性，不仅风味独特、适口性好，同时含有较高蛋白质、氨基酸、维生素和矿物质，具有很高的的营养价值(张英,李时群,穆楠等.鲜食型玉米的研发现状及发展前景[J].杂粮作物,2007,27(5):373～375.)。随着国民经济的增长和消费者膳食结构的调整，我国甜玉米种植面积和需求量也不断增加。但因其品种特性和较高的含糖量，甜玉米在田间受到多种微生物的危害。

细菌性条纹病于1960年首次在美国发现，多发生于美国中部和东部，温暖潮湿的气候有利于病害的发生。植株发病初期叶片上出现狭长的平行的退绿病斑，后期病斑变褐并枯死，严重影响植株的光合作用。2016年以前，菠萝泛菌(Pantoea ananatis)引起的细菌性条纹病在广东甜玉米种植区偶有发生。由于甜玉米常年连作使得土壤中的病原菌逐年积累，2016年开始，细菌性条纹病的发病率逐年上升，且发病程度越来越严重，严重影响了甜玉米的品质和产量。因此，建立一套成功的、高效的细菌性条纹病的病害鉴定系统，对现有的种植资源进行抗性鉴定，筛选出抗病的甜玉米材料具有重要的应用价值。

发明内容

为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的目的在于提供一种菠萝泛菌引起的玉米细菌性条纹病的鉴定方法。该方法可以高效的、稳定的对细菌性条纹病进行鉴定。

传统的玉米叶部病害多采用叶面喷雾法。但因菠萝泛菌属于细菌型致病菌，不能形成如附着胞、附着枝等侵染结构，突破细胞壁，进入细胞内部，因此需人为制造伤口，帮助病原菌侵入。因此，本发明接种利用注射器的针头沿着玉米叶片的叶脉划线，制造伤口，协助病原菌入侵，并模拟发病的环境，使菠萝泛菌在玉米叶片成功发病。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种菠萝泛菌引起的玉米细菌性条纹病的鉴定方法，包括如下步骤：

(1)培育玉米苗：将玉米种子消毒，播种；培育至三叶一心期，获得玉米苗；

(2)病原菌扩繁：将玉米细菌性条纹病致病菌菠萝泛菌(Pantoea ananatis)于LB培养基中扩繁，清水洗脱，离心收集，将病原菌的浓度调至10⁷数量级，并按照总体积加入0.2～0.5％(优选0.2％)的吐温20，制备菠萝泛菌悬浮液；

(3)病原菌接种：用无菌注射器吸取菠萝泛菌悬浮液，推动注射器，使针头处有菌液流出，并用针头在心叶上划线，将在伤口处均匀涂抹菠萝泛菌悬浮液；

(4)抗性鉴定：将接种后的玉米植株培育72h后，根据叶片病斑扩展情况对玉米材料的抗性进行鉴定；若伤口处发生坏死，坏死斑无扩散现象为高抗，记为HR；若伤口处坏死斑有少量扩散现象为抗病，记为R；若坏死斑扩散范围较大，叶片皱缩为感病，记为S；若坏死斑扩散至整个叶片，叶片萎蔫甚至枯死为高感，记为HS。

步骤(1)中所述的玉米优选为甜玉米；进一步优选为甜玉米品种粤甜28号、甜玉米自交系群1-1或甜玉米自交系GQ-1，但不限于此。

步骤(1)中所述的消毒是依次经酒精和NaClO消毒；具体消毒步骤如下：