[发明专利]结直肠癌奥沙利铂耐药相关的lncRNA的筛选及应用

说明书

本发明属于生物医药领域，具体涉及结直肠癌奥沙利铂耐药相关的lncRNA的筛选及应用，采用逐渐提高结直肠癌细胞株中奥沙利铂终浓度的方式成功诱导了结直肠癌奥沙利铂耐药细胞株SW480/OxR和HCT116/OxR。本发明对结直肠癌奥沙利铂耐药细胞株中耐药相关的lncRNA的筛选及应用进行了研究，通过qRT‑PCR检测发现lncRNA LINC00460和RP11‑260A9.6在SW480/OxR细胞株中高表达。本发明采用特异性siRNA沉默SW480/OxR细胞中的LINC00460，在奥沙利铂处理下，LINC00460的下调对细胞生长呈现剂量依赖和时间依赖的抑制作用，恢复了SW480/OxR细胞对奥沙利铂的敏感性，为解决肿瘤耐药性问题提供了新的思路和方案。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及结直肠癌奥沙利铂耐药相关的lncRNA的筛选及应用。

背景技术

结直肠癌是最常见的消化道恶性肿瘤之一，也是我国癌症相关死亡的主要原因，结直肠癌高发于50岁以上人群，其中发病率男性高于女性，并且随着年龄的增长发病率和死亡率逐渐升高。早期结直肠癌无明显症状，一般难以诊断，60-70％的确诊病例是在疾病的晚期被发现的。临床上结直肠癌的治疗以手术和化疗为主，其中，奥沙利铂是治疗结直肠癌最有效的一线化疗药物之一，并且是第一种被批准用于结直肠癌治疗的铂类药物；然而，多数患者中奥沙利铂单独或联合用药的固有或获得性耐药导致了治疗失败，几乎所有转移性结直肠癌最终都会产生奥沙利铂耐药性。

目前针对结直肠癌的筛查方法主要分为非侵入性和侵入性检测，每种方法都存在特定的优缺点。如粪便潜血试验和粪便免疫化学试验对发现肿瘤前病变的敏感性低，假阳性率高；而结肠镜和软性乙状结肠镜属于侵入性诊断技术，并且依从率低。因此，有必要发展新的具有高敏感性和特异性的非侵入性生物标志物，以帮助结直肠癌的早期诊断和治疗。

长链非编码RNA(long non-coding RNA，lncRNA)是一类长度大于200bp的调控型非编码RNA，通常没有蛋白质编码功能或具有较低的蛋白质编码潜力。目前已发现lncRNAs是分化、发育和疾病的新兴调节因子，通过与DNA、RNA和蛋白质的相互作用，参与转录和转录后水平的基因表达调控。LncRNA的功能具有多样性，研究发现，lncRNA与肿瘤耐药相关，具有肿瘤抑制或致癌功能，可驱动细胞增殖、迁移或基因组不稳定等多种重要的癌症表型。目前，多数lncRNA的研究工作仍处于功能鉴定阶段，进一步了解lncRNA在肿瘤学，尤其是肿瘤耐药性中的相关作用具有重大意义。

发明内容

本发明要解决的一个技术问题是提供结直肠癌奥沙利铂耐药细胞株SW480/OxR和HCT116/OxR诱导后差异表达lncRNA的筛选。

本发明要解决的另一个技术问题是提供lncRNA在结直肠癌奥沙利铂耐药中的应用，所述lncRNA为LINC00460和RP11-260A9.6，一种代表性的转录LINC00460基因的核苷酸序列如ENST00000444865.2所示，一种代表性的转录RP11-260A9.6基因的核苷酸序列如ENST00000580686.1所示。

为弥补上述现有技术的不足，本发明采用如下技术方案：

本发明的第一方面提供一种由结直肠癌细胞株SW480和HCT116诱导为结直肠癌奥沙利铂耐药细胞株SW480/OxR和HCT116/OxR的方法。

进一步，采用CCK-8实验分析SW480、HCT116、SW480/OxR和HCT116/OxR结直肠癌细胞株在奥沙利铂处理下的生存曲线。

更进一步，根据CCK-8实验分析SW480、HCT116、SW480/OxR和HCT116/OxR结直肠癌细胞株对奥沙利铂的IC50值，确定上述4种细胞株的奥沙利铂耐药性差异。