[发明专利]结直肠癌奥沙利铂耐药相关的lncRNA的筛选及应用

权利要求书

1.结直肠癌奥沙利铂耐药相关的lncRNA的筛选，其特征在于，通过结直肠癌细胞株SW480和HCT116诱导为结直肠癌奥沙利铂耐药细胞株SW480/OxR和HCT116/OxR，达到构建耐药细胞株模型后筛选耐药相关lncRNA的目的。

2.根据权利要求书1所述的耐药细胞株模型，其特征在于，采用逐渐提高SW480和HCT116细胞培养液中奥沙利铂终浓度的方法，实现结直肠癌奥沙利铂耐药细胞株SW480/OxR和HCT116/OxR的诱导。

3.根据权利要求书3所述耐药细胞株的诱导，奥沙利铂处理浓度为1-10μM。

4.根据权利要求书1所述的筛选，通过qRT-PCR检测筛选出lncRNA LINC00460和RP11-260A9.6在结直肠癌奥沙利铂耐药细胞株SW480/OxR中高表达。

5.根据权利要求书4所述lncRNA的qRT-PCR检测，将lncRNA与Oligo(dT)、RandomPrimer(N9)及适量的DEPC水混匀，在70℃下加热10min以破坏其二级结构后，再进行逆转录反应程序。

6.结直肠癌奥沙利铂耐药相关的lncRNA的应用，其特征在于，采用特异性的siRNA沉默SW480/OxR细胞中的LINC00460和RP11-260A9.6，达到下调SW480/OxR细胞中LINC00460和RP11-260A9.6的目的。

7.根据权利要求书6所述的应用，通过CCK-8实验分析发现在奥沙利铂处理下，LINC00460下调对SW480/OxR细胞生长呈现剂量依赖和时间依赖的抑制作用。

8.根据权利要求书7所述的抑制作用，采用CCK-8实验检测不同奥沙利铂浓度处理下LINC00460下调对SW480/OxR细胞生长的作用时，奥沙利铂浓度梯度为0/10/20/35/50μM，处理时间为48h。

9.根据权利要求书7所述的抑制作用，采用CCK-8实验检测奥沙利铂处理下LINC00460下调对SW480/OxR细胞生长在不同时间点的作用时，奥沙利铂浓度为20μM，处理时间为0/24/48/72h。