[发明专利]失活和提取耐酸细菌以用于使用质谱分析法表征和/或鉴定的方法

权利要求书

1.一种用于失活和提取测试样品中的耐酸细菌的方法，所述方法包括以下连续步骤：

(a)从已知包含或可能包含耐酸细菌的固体或半固体培养基中获得测试样品，并将所述测试样品悬浮于包含乙醇和珠的容器中；

(b)珠磨和/或涡旋所述容器以打碎所述容器中的团块和/或破坏所述容器中的耐酸细菌细胞；以及

(c)随后在室温下温育所述悬浮液至少约5分钟，以失活所述测试样品中包含的任何分支杆菌(mycobacteria)。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述方法还包括以下另外的连续步骤：

(d)离心所述容器以沉淀所述耐酸细菌样品并除去所述上清液；

(e)重悬耐酸细菌沉淀于甲酸中；以及

(f)随后将乙腈加入至所述容器中。

3.如任何前述权利要求所述的方法，其中所述方法还包括以下另外的连续步骤：

(g)将来自步骤(f)的上清液的等分试样转移至质谱分析法的靶载玻片并将基质溶液加入至所述上清液；以及

(h)通过质谱分析法询问所述载玻片或板上的测试样品以获得所述耐酸细菌的一种或更多种质谱，并且通过将所测量的一种或更多种质谱与一种或更多种参考质谱比较来表征和/或鉴定所述测试样品中的所述耐酸细菌。

4.如任何前述权利要求所述的方法，其中所述耐酸细菌为分枝杆菌属(Mycobacteria)或诺卡氏菌属(Nocardia)。

5.如权利要求2-4所述的方法，其中将来自步骤(d)的上清液直接或作为水悬浮液，应用至质谱分析法的载玻片或板。

6.如任何前述权利要求中所述的方法，其中所述容器包含70％乙醇。

7.如任何前述权利要求所述的方法，其中所述珠是0.5mm玻璃珠。

8.如权利要求2-8中所述的方法，其中将步骤(d)中的沉淀重悬于70％甲酸中。

9.如权利要求2-8中所述的方法，其中加入乙腈至从约35％至约65％的终浓度。

10.如任何前述权利要求所述的方法，其中所述方法还包括珠磨或涡旋步骤(b)中的容器约1分钟至约30分钟。

11.如任何前述权利要求所述的方法，其中所述方法还包括温育步骤(c)中的悬浮液至少约5分钟。

12.如任何前述权利要求所述的方法，其中所述方法还包括温育步骤(c)中的悬浮液至少约10分钟。

13.如权利要求2-12所述的方法，其中在步骤(e)中将所述沉淀重悬于至少约3μL的甲酸中。

14.如权利要求2-12所述的方法，其中在步骤(f)中将至少约3μL乙腈加入至重悬的沉淀。

15.如任何前述权利要求中所述的方法，其中所述方法还包括在步骤(f)之后离心所述容器中的测试样品。

16.如权利要求3-15中所述的方法，其中步骤(g)包括将所述测试样品的等分试样转移至质谱分析法的载玻片或板，允许所述等分试样干燥并随后加入基质。

17.如权利要求3-16中所述的方法，其中所述基质是α-氰基-4-羟基肉桂酸(CHCA)。

18.如权利要求3-16中所述的方法，其中将所述耐酸细菌鉴定至属、种和/或菌株水平。