[发明专利]PDL1-pHLIP、制备方法及其在治疗自身免疫病中的应用

说明书

本发明公开了PDL1‑pHLIP、制备方法及其在治疗自身免疫病中的应用。本发明的融合肽是由低pH插入肽与PDL1的胞外段连接而成。在酸性环境下，低pH插入肽可插入到病灶组织细胞膜上，利用低pH插入肽的上述性质，将与其连接的PDL1靶向定位在病灶部位，利用低pH插入肽增强病灶组织PD‑1/PD‑L1负性信号，从源头上抑制效应T细胞免疫反应，从而发挥防治自身免疫病的作用。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及PDL1-pHLIP、制备方法及其在治疗自身免疫病中的应用。

背景技术

自身免疫病主要是机体对自身抗原发生免疫反应，免疫细胞大量浸润，免疫组织代谢异常导致的自身组织损害所引起的疾病。

自身免疫病按病变组织涉及的范围可分为两大类，第一类是器官特异性自身免疫病，可累及包括脑、甲状腺、胃在内的多个器官；第二类为非器官特异性自身免疫病，可累及肌肉、皮肤、关节等多个组织。目前已知的自身免疫病就有100多种，约累及5％的人口，常见的有系统性红斑狼疮、类风湿关节炎、系统性血管炎、硬皮病等。

生命系统为保证生命的基本反应一般具有严格控制的化学环境.健康组织的正常细胞中，细胞内外pH一般相对恒定，细胞外pH为pH7.4，但在自身免疫病的病变部位，由于炎性免疫细胞的大量浸润和高代谢，导致局部乳酸浓度急剧升高，这种平衡会遭到破坏，细胞外pH一般在6.2-7.0之间，产生酸性的细胞外微环境。来源于细菌视紫红质的跨膜螺旋蛋白C的低pH插入肽(pHLIP，pH low insertionpeptide)恰巧是一种可以靶向这种微酸环境的多肽载体。pHLIP由侧翼序列和跨膜(trans membrane,TM)序列组成，其中侧翼序列由质子化氨基酸残基构成，TM序列由疏水残基构成。pHLIP在中性的溶液中不形成跨膜的单螺旋，但在酸性溶液中且存在双脂层时pHLIP可以形成C-螺旋结构并插入到细胞膜上。

pHLIP一般有三种状态，在pH值为7.4左右的健康组织中，处于溶解状态(状态I)或弱结合在膜上(状态II)，pHLIP通过正常灌注从膜上冲洗，并继续在体内循环。在pH值为酸性的炎症组织中，pHLIP自发折叠成跨膜螺旋，插入膜上(状态III)。

目前pHLIP在核成像，荧光引导手术，基因治疗及纳米技术中的应用都是十分广泛的。利用pHLIP的酸性环境趋向性开发利于治疗自身免疫病的药物是未来的研究热点。

发明内容

本发明是基于以下构思完成的：将PD-L1胞外段与pHLIP的N端相连通过pHLIP将PD-L1胞外段展示在病变部位组织细胞膜上，利用pHLIP增强病灶组织PD-1/PD-L1负性信号，从源头上抑制效应T细胞免疫反应，对防治自身免疫病的发生、发展起一定作用。

本发明的目的之一在于提供一种PD-L1与低pH插入肽形成的融合肽。

本发明的目的之二在于提供上述融合肽形成的治疗自身免疫病的药物组合物。

本发明的目的之三在于提供PD-L1在制备上述融合肽中的应用。

本发明的目的之三在于提供上述融合肽的用途。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

根据本发明的一个方面，本发明提供了一种低pH插入肽的融合肽，所述融合肽包括低pH插入肽、免疫检查点配体或其片段。

免疫检查点包括PD-1、Lag-3、Tim-3、TIGIT、CTLA-4。

PD-1配体包括PD-L1、PD-L2。

Lag-3配体包括纤维蛋白原样蛋白1、LSECtin。

Tim-3配体包括半乳糖凝集素-9、磷脂酰丝氨酸、高迁移率族蛋白B1、Ceacam-1。