[发明专利]检测低突变丰度样本的NGS文库制备接头及其制备方法

权利要求书

1.一种检测低突变丰度样本的NGS文库制备接头，其特征在于：包括P5端寡核苷酸链和P7端寡核苷酸链，寡核苷酸链上含有P5及P7引物序列，还包括a.测序引物位点SP序列；b.UMIs序列；c.样本标签Index序列；其中，P5端寡核苷酸链包括P5引物序列，其3’端依次连接测序引物位点SP序列、连接在一起的UMIs序列和样本标签Index序列，P7端寡核苷酸链包括P7引物序列，其5’端依次连接测序引物位点SP序列、连接在一起的UMIs序列和样本标签Index序列；P5与P7端寡核苷酸链除P5及P7引物序列外，其他部分序列反向互补；所述NGS文库制备接头呈Y型结构，P5及P7引物序列为分别为Y型上方的两头。

2.根据权利要求1所述的检测低突变丰度样本的NGS文库制备接头，其特征在于：所述UMIs序列为一段1-16碱基的随机寡核苷酸。

3.根据权利要求1所述的检测低突变丰度样本的NGS文库制备接头，其特征在于：所述样本标签Index序列为一段1-16碱基寡核苷酸。

4.根据权利要求1所述的检测低突变丰度样本的NGS文库制备接头，其特征在于：所述接头含3’T粘性末端。

5.根据权利要求1所述的检测低突变丰度样本的NGS文库制备接头，其特征在于：所述接头正链及负链5‘端含磷酸化基团。

6.一种权利要求1-5任一项所述的检测低突变丰度样本的NGS文库制备接头的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)合成P5端寡核苷酸链和P7端寡核苷酸链：

寡核苷酸链包括P5/P7引物序列，还包括a.测序引物位点SP序列；b.UMIs序列；c.样本标签Index序列；

(2)接头合成及制备：

1)将步骤(1)合成的P5端寡核苷酸链和P7端寡核苷酸链进行链融合；

2)对步骤1)链融合得到的DNA进行链延伸；

3)对步骤2)产物DNA进行酶切消化，在双链末端制备出T粘性末端。

7.根据权利要求6所述的检测低突变丰度样本的NGS文库制备接头的制备方法，其特征在于：步骤1)所述链融合，具体为：

①将合成的P5和P7端寡核苷酸链溶解，并调整浓度为1-100uM，二者的溶液等浓度；

②将步骤①配置好的P5和P7端寡核苷酸链溶液等体积混合，加入等体积链融合缓冲液，混匀；

③95℃孵育10min；

④自然冷却至室温；

⑤将混合溶液中的DNA沉淀出来；

⑥乙醇溶液清洗所得DNA沉淀，晾干；并加入适量水或TE溶解。

8.根据权利要求6所述的检测低突变丰度样本的NGS文库制备接头的制备方法，其特征在于：步骤2)所述对步骤1)链融合得到的DNA进行链延伸，包括以下步骤：

①配制含Klenow酶延伸体系；

②上述体系在37℃孵育10min至24h；

③将混合溶液中的DNA沉淀出来；

④乙醇溶液清洗所得DNA沉淀，晾干；加入适量水或TE溶解。

9.根据权利要求6所述的检测低突变丰度样本的NGS文库制备接头的制备方法，其特征在于：步骤3)所述对步骤2)产物DNA进行酶切消化，包括以下步骤：

①配制含HPYCH4III酶的酶切体系；

②将上述体系在37℃孵育10min至24h；

③将混合溶液中的DNA沉淀出来；

④乙醇溶液清洗所得DNA沉淀，晾干；加入适量水或TE溶解。