[发明专利]用于鉴定实验用小型猪品种的特异性微卫星引物组合物及鉴定实验用小型猪品种的方法

说明书

本发明公开了一种用于鉴定实验用小型猪品种的特异性微卫星引物组合物以及鉴定实验用小型猪品种的方法，所述引物组合物包括3对引物。本发明基于小型猪种基因组中的微卫星序列，通过群体试验验证并筛选得到了实验用小型猪不同品种间特异的微卫星序列及引物，优化了所述引物的试验条件和使用方法，解决了实验用小型猪品种的鉴定。

技术领域

本发明属于基因检测技术领域，尤其涉及一种用于鉴定实验用小型猪品种的特异性微卫星引物组合物及鉴定实验用小型猪品种的方法。

背景技术

实验用小型猪是生物医学研究中应用最为广泛的非啮齿类大型实验动物之一，具有其它实验动物不可替代的优越性，而且作为异种器官移植最可能的供体成为研究热点，小型猪的研究和开发利用受到生物医药界的普遍关注。实验用小型猪的品种品系多种多样，在我国典型的有五指山猪、巴马猪、近交陆川猪、藏香猪、西藏小型猪、版纳微型猪、剑白香猪、蕨麻小型猪、乌金猪、合作猪等。然而有些小型猪品种的外形相似，或在培育过程中出现杂交繁育的现象，导致难以用肉眼依据表型进行品种的鉴别，急需科学的鉴别手段。

目前，从基因角度鉴定植物或动物品种的研究很多，其中最为有效的方法是基于微卫星两端序列的保守性，设计特异性的引物进行品种鉴别。然而，由于猪基因组中微卫星的挖掘不够全面，只能利用其它物种的微卫星序列进行同源比较分析，设计的相应引物不具有品种间特异性，在进行品种鉴定时费时费力且结果不准确，限制了实验用小型猪品种的鉴定。

发明内容

本发明针对现有技术中实验用小型猪外形相似，肉眼难以鉴别的技术问题，目的在于提高一种利用基因技术手段鉴定实验用小型猪品种的方法。

本发明的目的之一在于提供一种用于鉴定实验用小型猪品种的特异性微卫星引物组合物，所述引物组合物包括3对引物，具体为：

如SEQ ID NO:1所示的正向荧光引物F7：

ATCCCCCACTCATTCTCACA；

如SEQ ID NO:2所示的反向普通引物R7：

GCAAAACTGCACACAGCCTA；

如SEQ ID NO:3所示的正向荧光引物F9:

TCCAGGCCCAGGTTGTATTA；

如SEQ ID NO:4所示的反向普通引物R9:

AGGATCTTTTTCGGCAGGAT；

如SEQ ID NO:5所示的正向荧光引物F19:

CAGCTTACAGCAAAAGTAGCCA；

如SEQ ID NO:6所示的反向普通引物R19:

AAGATGTTTCATCAGACTATATCCGT。

其中，F7、R7指7号微卫星座的正向引物和反向引物；F9、R9指9 号微卫星座的正向引物和反向引物；F19、R19指19号微卫星座的正向引物和反向引物。也即，7号微卫星座的核苷酸序列是小型猪上位于正向引物F7 核苷酸序列和反向引物R7核苷酸序列之间的一段核苷酸序列；9号微卫星座的核苷酸序列是小型猪上位于正向引物F9核苷酸序列和反向引物R9核苷酸序列之间的一段核苷酸序列；19号微卫星座的核苷酸序列是小型猪上位于正向引物F19核苷酸序列和反向引物R19核苷酸序列之间的一段核苷酸序列。

其中，所述实验用小型猪品种为：五指山猪、巴马猪、近交陆川猪或藏香猪。

本发明的方法可以鉴定任何生长阶段的实验用小型猪品种，主要包括：五指山猪、巴马猪、近交陆川猪和藏香猪，从基因角度入手，利用3对品种特异性的微卫星引物进行荧光引物PCR扩增、纯化、毛细管电泳及数据分析等过程，准确鉴定实验用小型猪品种。