[发明专利]一种诊断用对羟基苯甲酸羟化酶及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 202010184842.2 | 申请日： | 2020-03-17 |
| 公开（公告）号： | CN111334483B | 公开（公告）日： | 2023-04-25 |
| 发明（设计）人： | 李本涛;黄任平;李仕亮 | 申请（专利权）人： | 湖南新大陆生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/02 | 分类号： | C12N9/02;C12N15/53;C12N15/70;C12Q1/46;C12Q1/26 |
| 代理公司： | 福州市景弘专利代理事务所(普通合伙) 35219 | 代理人： | 林祥翔;黄以琳 |
| 地址： | 410000 湖南省长沙市高新开发区谷苑路*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 诊断 羟基 苯甲酸 羟化酶 及其 制备 方法 应用 | ||
【权利要求书】：
1. 一种诊断用对羟基苯甲酸羟化酶，其特征在于，编码所述的对羟基苯甲酸羟化酶基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
2.根据权利要求1所述的诊断用对羟基苯甲酸羟化酶，其特征在于，所述的对羟基苯甲酸羟化酶的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。
3.一种如权利要求1或2所述的诊断用对羟基苯甲酸羟化酶的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括如下步骤：
从施氏假单胞菌提取RNA，逆转录合成cDNA，PCR扩增对羟基苯甲酸羟化酶基因
将对羟基苯甲酸羟化酶基因
将重组表达载体转化DH5a菌株；
将测序正确的重组表达载体转化表达宿主；
经过异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷诱导表达和Ni柱亲和层析纯化、脱盐、浓缩之后，制成酶制剂。
4.根据权利要求3所述的诊断用对羟基苯甲酸羟化酶的制备方法，其特征在于，所述的表达载体包括pET-28a、pET-32a，或pCold TF其中的一种。
5.根据权利要求3所述的诊断用对羟基苯甲酸羟化酶的制备方法，其特征在于，所述的表达宿主包括大肠杆菌、芽孢杆菌、酵母菌、昆虫细胞或哺乳动物细胞其中的一种。
6.一种如权利要求1或2所述的诊断用对羟基苯甲酸羟化酶在制备胆碱酯酶检测试剂中的应用。
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