[发明专利]具有促进组织修复的家蝇多肽及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了具有促进组织修复的家蝇多肽及其制备方法与应用，该多肽的氨基酸序列为：Leu‑Ala‑Asp‑Glu‑Glu‑Ser‑Arg‑Glu‑Arg‑Ala‑Thr‑Leu‑Leu‑Gly。本发明采用现代生化技术手段，对家蝇中促进组织修复的多肽进行跟踪筛选和评价，通过乙醇提取、萃取、离子交换树脂和反相高效液相色谱法等纯化方法制备得到，实验结果表明，该多肽可促进人永生化表皮细胞的增殖与迁移，毒副作用低，能够用于制备美白、祛皱、祛色斑等药物或护肤品，可明显改善皮肤美感，具有很好的应用前景。

技术领域

本发明涉及一种活性多肽，具体涉及一种家蝇提取物中分离得到的具有促进组织修复作用的活性多肽及其制备方法，属于生物医药技术领域。

背景技术

皮肤创伤愈合是指由于遭受外力作用，皮肤组织出现离断或缺损后的愈复过程，包括各种组织的修复与再生，如细胞增殖、分化、迁移等过程。表皮及其它组织再生通常发生在创伤后的24小时内，伤口边缘的基底细胞即开始增生，并在凝块下面向伤口中心迁移，形成单层上皮，覆盖于肉芽组织的表面。因此，促进组织细胞增殖、迁移、修复对于创伤愈合非常重要。

多肽类药物在促进创面愈合方面具有独特的优势，效应强，安全性高。如表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子等多肽具有明显的修复创伤的作用；且现代研究发现，动物来源的活性多肽也具有非常好的促进创伤修复的功效。

《本草纲目》有关于金蝇幼虫可用来“治小儿诸疳积、疳疮，热病谵语，毒痢作吐。”金蝇幼虫具有健脾消积，清热除疳的功效。申请人前期研究发现，家蝇提取物具有较好的促进人永生化表皮细胞(HaCat)增殖与迁移的作用，但是其功效成分仍不明确。

发明内容

发明目的：本发明的目的在前期研究基础上，通过大量实验筛选，采用现代生化技术手段，对家蝇提取物中促进组织修复成分进行跟踪评价，通过萃取、强氧离子交换色谱和反相高效液相色谱法等纯化方法制备得到一种促进组织修复的家蝇多肽，实验结果表明，本发明分离得到的多肽具有很好的促进HaCat细胞增殖与迁移的作用，有很好的促进组织修复的功效。

技术方案：为了实现以上目的，本发明采取的技术方案为：

一种促进组织修复的家蝇多肽，该多肽具有下述的氨基酸序列：Leu-Ala-Asp-Glu-Glu-Ser-Arg-Glu-Arg-Ala-Thr-Leu-Leu-Gly。

本发明所述的促进组织修复的家蝇多肽的制备方法，包括以下步骤：

(1)家蝇提取物的制备：取粉碎或未粉碎的家蝇全体，加入乙醇提取，浓缩得到家蝇提取物；

(2)萃取：将步骤(1)的家蝇提取物，用甲醇溶液分散，加入氯仿，充分振摇，静置后，弃去氯仿层，将甲醇溶液部分离心、浓缩干燥，得到家蝇提取物甲醇部位；

(3)强氧离子交换树脂分离：取步骤(2)得到的甲醇部位，用甲酸铵溶液复溶，反复上样强氧离子交换树脂分离小柱，先用5～10mM用甲酸铵溶液冲洗7～8次后，再用甲酸铵溶液洗脱小柱，收集洗脱液，得到家蝇多肽部位；

(4)反相色谱分离纯化：取步骤(3)得到的家蝇多肽部位，以甲酸溶液复溶后，经过反相制备高效液相色谱分离，流动相：A相为体积浓度0.1％甲酸；B相为甲醇，梯度洗脱；流速：5～10mL/min；柱温：30℃，检测波长为220nm，分离收集得到家蝇多肽，该多肽氨基酸序列为：Leu-Ala-Asp-Glu-Glu-Ser-Arg-Glu-Arg-Ala-Thr-Leu-Leu-Gly。

作为优选方案，以上所述的促进组织修复的家蝇多肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)家蝇提取物的制备：取粉碎或未粉碎的家蝇全体，加入体积浓度70％乙醇提取，过滤，得提取物，浓缩；