[发明专利]用于犬细粒棘球绦虫的LAMP检测引物组、试剂盒及方法

权利要求书

1.一组用于犬细粒棘球绦虫的LAMP检测引物组，其包括：与犬细粒棘球绦虫的COX2基因序列结合的外侧引物对F3和B3，及与犬细粒棘球绦虫的COX2基因序列结合的内侧引物对FIP和BIP，其特征在于：所述F3和B3的核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，所述FIP和BIP的核苷酸序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。

2.如权利要求1所述的用于犬细粒棘球绦虫的LAMP检测引物在制备检测犬细粒棘球绦虫的LAMP试剂盒或检测试剂中的应用。

3.含如权利要求1所述用于犬细粒棘球绦虫的LAMP检测引物的检测试剂盒。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，其还包括：环介导等温扩增缓冲液、阳性对照、阴性对照和/或显色液。

5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述环介导等温扩增缓冲液为包括有Tris-HCl、KCl、(NH₄)₂SO₄、Tween-20、MgSO₄、甜菜碱、脱氧核苷酸、Bst DNA聚合酶的水溶液；

所述显色液包括SYBR Green I和羟甲基萘酚蓝。

6.一种采用如权利要求1所述引物组的快速检测犬细粒棘球绦虫的LAMP检测方法，是用所述的犬细粒棘球绦虫的LAMP检测引物组对待测样品DNA进行环介导等温扩增反应，检测扩增产物；所述环介导等温扩增反应的条件为：63℃、30～60分钟。

7.如权利要求6所述的LAMP检测方法，其特征在于，其包括如下步骤：

S1、取犬粪便待检样本，提取DNA；

S2、用所述的犬细粒棘球绦虫的LAMP检测引物组对待测样品DNA进行环介导等温扩增反应；

S3、结果判定：如果装有待检测样品的反应管仍为棕黄色无荧光液体，则说明待检样品中犬细粒棘球绦虫检测结果为阴性；

如果装有待检测样品的反应管有亮绿色可见荧光，则说明样品中犬细粒棘球绦虫检测结果为阳性。

8.如权利要求7所述的LAMP检测方法，其特征在于，在步骤S2中，同时设置以含犬细粒棘球绦虫的DNA为阳性对照和以水进行检测的阴性对照。

9.如权利要求7所述的LAMP检测方法，其特征在于，在步骤S2中，所述环介导的等温扩增的扩增体系为在有23μl的LAMP反应液的反应管中加入2μl所述DNA；所述23μl的LAMP反应液，包括有Tris-HCl 0.5μmol、KCl 0.25μmol、(NH₄)₂SO₄ 0.25μmol、Tween-20 0.025μL、MgSO₄ 0.2-20μmol、甜菜碱20μmol、4种脱氧核苷酸各0.035μmol、Bst DNA聚合酶16U，所述内侧引物对FIP和BIP各0.04-0.06μmol，所述外侧引物对F3和B3各0.004-0.008μmol。

10.如权利要求9所述的LAMP检测方法，其特征在于，所述23μl的LAMP反应液包括：Tris-HCl 0.5μmol、KCl 0.25μmol、(NH₄)₂SO₄ 0.25μmol、Tween-20 0.025μL、MgSO₄ 0.2μmol、甜菜碱20μmol、4种脱氧核苷酸各0.035μmol、Bst DNA聚合酶16U，所述内侧引物对FIP和BIP各0.04μmol，所述外侧引物对F3和B3各0.004μmol。