[发明专利]一种基于光信号检测的蛋白酶活性检测方法及其应用

权利要求书

1.一种基于光信号检测的蛋白酶活性检测方法,其特征在于，包括如下步骤：

S1.向可能含蛋白酶的待检样本及一阴性对照中，加入带有特定氨基酸序列的光信号激活分子A或含有它的溶液；未带有特定氨基酸序列的独立的完整的光信号激活分子B能产生光信号，且是一种蛋白质；该特定氨基酸序列具有至少一个可以被蛋白酶裂解的裂解位点，使用带有特定氨基酸序列的光信号激活分子A采用以下方案中的任意一种：

方案一：带有特定氨基酸序列的光信号激活分子A是光信号激活分子B被该特定氨基酸序列插入到该光信号激活分子B中间的产物；此带有特定氨基酸序列光信号激活分子A仍能产生光信号；当该特定氨基酸序列被蛋白酶切割，将光信号激活分子B切割为第一蛋白和第二蛋白两部分，此第一蛋白和第二蛋白不能产生光信号；

方案二：带有特定氨基酸序列的光信号激活分子A是光信号激活分子B带有特定氨基酸序列连接到失活实体上的产物，此失活实体可以抑制该光信号激活分子B的活性，此带有特定氨基酸序列的光信号激活分子A不能产生光信号；当特定氨基酸序列被蛋白酶裂解，释放该光信号激活分子B，该光信号激活分子B导致光信号增加；

方案三：带有特定氨基酸序列的光信号激活分子A是光信号激活分子B带有特定氨基酸序列连接到可移除实体上的产物，此可移除实体不会导致光信号激活分子B的失活，此带有特定氨基酸序列的光信号激活分子A仍能产生光信号；当特定氨基酸序列未被蛋白酶裂解，带有特定氨基酸序列的光信号激活分子A含有的光信号激活分子B与可移除实体的一起从反应中被物理移除；当特定氨基酸序列被蛋白酶裂解，只有可移除实体从反应中被物理移除，而保留了光信号激活分子B；

S2.孵育一段时间后，进行光信号检测，检测步骤(1)包括检测带有特定氨基酸序列的光信号激活分子A的样本光信号强度，并同时检测阴性对照，该阴性对照同样孵育一段时间后，测量光信号强度，通过比较阴性对照的光信号强度，判断样本光信号强度变化。

2.根据权利要求1所述的基于光信号检测的蛋白酶活性检测方法,其特征在于，在S1的方案一中，还加入抑制剂，该抑制剂可特异性地抑制蛋白酶的活性，使该特定氨基酸序列不会被蛋白酶切割。

3.根据权利要求1或2所述的基于光信号检测的蛋白酶活性检测方法,其特征在于，所述光信号激活分子B为荧光素酶、过氧化物酶或碱性磷酸酶。

4.根据权利要求3所述的基于光信号检测的蛋白酶活性检测方法,其特征在于，所述荧光素酶是萤火虫荧光素酶、叩头虫荧光素酶或细菌荧光素酶。

5.根据权利要求1或2所述的基于光信号检测的蛋白酶活性检测方法,其特征在于，所述待检蛋白酶为病原体编码的蛋白质中含有的蛋白酶。

6.根据权利要求5所述的基于光信号检测的蛋白酶活性检测方法,其特征在于，所述病原体为人类免疫缺陷病毒、人类丙型肝炎病毒、冠状病毒、西尼罗河病毒、寨卡病毒或登革热病毒，该病原体编码的病毒蛋白酶可裂解所述特定氨基酸序列。

7.根据权利要求6所述的基于光信号检测的蛋白酶活性检测方法,其特征在于，当病原体为冠状病毒时，所述蛋白酶为PL蛋白酶和/或3CL蛋白酶；当病原体为人类免疫缺陷病毒时，所述蛋白酶为艾滋病毒逆转录病毒天门冬氨酰蛋白酶，当病原体为人类丙型肝炎病毒时，所述蛋白酶是NS3/NS4丝氨酸蛋白酶；当病原体为登革病毒时，所述蛋白酶是NS2/NS3蛋白酶,当病原体为西尼罗河病毒时，所述蛋白酶是NS2/NB3蛋白酶；当病原体为寨卡病毒时，病毒蛋白酶是NS2B/NS3蛋白酶。

8.根据权利要求7所述的基于光信号检测的蛋白酶活性检测方法,其特征在于，所述冠状病毒为新型冠状病毒COVID-19或SARS-COV或其他受体为ACE2的冠状病毒；所述待测样本为尿样、血样、或粪便。

9.根据权利要求1-8任一所述的基于光信号检测的蛋白酶活性检测方法,其特征在于，所述特定氨基酸序列是由至少三个氨基酸组成的氨基酸序列组成。

10.权利要求1至9任一所述的基于光信号检测的蛋白酶活性检测方法在制备用于临床诊断包括冠状病毒在内的病原体感染的试剂盒中的应用。