[发明专利]一种利用RRAD遗传标记检测牛胴体和肉质性状的方法

说明书

本发明公开了一种利用RRAD基因遗传标记检测牛胴体肉质性状的方法，尤其涉及一种通过RRAD基因3’非翻译区（3’UTR）序列的SNPs作为牛肉质和胴体性状分子标记的检测方法，通过对牛的基因组DNA混池或个体DNA为模板进行PCR扩增，采用DNA测序的方法检测，公开了1个SNP1位点，并基于对每个个体的SNP1进行了基因分型与牛胴体和肉质性状的关联分析结果，提供了一种能够在DNA水平上早期筛查和预测牛胴体和肉质性状的分子标记，应用于牛的分子育种及早期选育；本发明利用RRAD基因的SNP1即3’UTR 198 GA，作为检测肉牛胴体和肉质性状遗传标记的方法，为遗传育种研究和生产饲养早期选育优质牛个体及改善牛肉质和胴体性状奠定基础。

技术领域

本发明公开了一种利用RRAD基因遗传标记检测牛胴体肉质性状的方法，尤其涉及一种通过RRAD基因3’非翻译区（3’UTR）序列的SNPs作为牛肉质和胴体性状分子标记的检测方法，属于选育预测和选育牛胴体和肉质性状技术领域。

背景技术

随着畜牧业和养牛产业的不断发展，高档优质肉牛的选育和高品质牛肉的生产受到来自生产者和消费者越来越多的关注；肉牛胴体及肉质的相关性状是作为肉品质分析的重要指标，改善肉质性状是牛的育种领域的研究热点，在食品科学领域进一步衡量肉质等级的重要标准。

为加快牛生长速度，提高牛肉品质，从基因角度，利用分子的遗传标记选育肉牛是研究牛胴体和肉品质性状的主要手段；单核苷酸多态性（SNPs）标记技术作为当前应用最广泛的遗传标记技术，在动物遗传育种研究领域发挥着重要作用。SNPs常用的检测方法包括DNA直接测序以及限制性片段长度多态性聚合酶链式反应（RFLP-PCR）等。针对以上两种方法，目前DNA直接测序检测SNPs的方法更为简单、快速、准确，适用于大群体动物样本的检测。

Ras相关糖酵解抑制剂和钙通道调节剂（RRAD）基因位于人类染色体16号染色体，是一类编码小GTP酶的基因，也是代谢综合征和钙稳态失调最引人注目的基因之一。在肌肉细胞中，该基因编码的小GTP酶直接结合钙离子通道β亚基来调节细胞内钙离子信号传导。RRAD通过与钙调蛋白的相互作用也具有调节功能，该基因最初被称为与糖尿病相关的Ras相关基因，因为通过减法克隆技术，RRAD在4000个cDNA克隆中被鉴定作为唯一在2型糖尿病个体的骨骼肌中与非糖尿病或1型糖尿病个体相比过表达的基因。研究人员发现，在培养的心肌细胞中，过表达RRAD可降低胰岛素刺激的葡萄糖摄取50-90％，这是由于葡萄糖转运蛋白4（胰岛素依赖性葡萄糖转运蛋白）的内在活性降低引起的。骨骼肌中过表达RRAD的转基因小鼠的体内研究发现，高脂喂养不仅在转基因小鼠中产生胰岛素抵抗，而且与对照组相比，甘油三酯代谢也增加，表明RRAD可能通过与脂肪酸的底物竞争而独立于其对葡萄糖转运蛋白的作用而抑制糖酵解。同时，在人类的相关研究也发现，RRAD基因启动子区异常甲基化会导致基因沉默，从而可能导致人类的疾病。在T29和T29H细胞中通过运用基因沉默和过表达技术手段，发现甲基化沉默RRAD通过抑制葡萄糖转运因子的表达抑制糖摄取和乳酸产生的作用。牛RRAD基因定位于18号染色体，4个外显子，编码区全长927bp，编码308个氨基酸。研究表明RRAD基因在不同脂肪沉积能力的牛背最长肌中差异表达，与荷斯坦牛相比，日本和牛中RRAD的表达水平降低了2.36倍，但是关于RRAD的SNPs与牛肉质和胴体性状相关的研究目前尚无报道。

发明内容

本发明提供了一种RRAD基因分子标记检测牛胴体和肉质性状的方法，利用RRAD基因标记作为预测和选育肉牛胴体及肉质性状的方法，为遗传工作者的早期选育及改善肉品质从而进一步提高肉牛养殖的经济效益奠定基础。

本发明提供一种RRAD基因分子标记作为牛肉质和胴体性状中的用途，其特征在于：

上述基因的分子标记为牛RRAD基因的3’非翻译区（UTR）的198bp处G/A突变，即SNP1：3’UTR 198 GA。

3.根据权利要求1本发明所述的RRAD基因SNP1作为检测牛肉质性状分子标记的方法，包括以下步骤：