[发明专利]一种UV和SERS同时检测食源性致病菌的方法

说明书

本发明公开了一种UV和SERS同时检测食源性致病菌的方法。包括下述步骤：S1将十六烷基三甲溴化铵、氯金酸和硼氢化钠混合后进行第一反应；S2将第一混合液与十六烷基三甲溴化铵、氯金酸、硝酸银和抗坏血酸混合后进行第二反应，收集固体产物并与水混合；S3将第二混合液与适配体DNA、染料、羟胺盐酸盐和氯铂酸混合后进行第三反应，得信号探针和纳米酶溶液；S4将含有纳米磁球的液体与抗体混合，得捕获探针溶液；S5将信号探针和纳米酶溶液、捕获探针溶液和待检测溶液混合后进行测试反应，磁分离后得检测混合液；S6将检测混合液进行SERS检测；S7将检测混合液与TMB溶液、H₂O₂溶液和缓冲液混合进行UV检测。

技术领域

本发明属于致病菌检测技术领域，具体涉及一种UV和SERS同时检测食源性致病菌的方法检测食源性致病菌的方法。

背景技术

食源性疾病已成为目前国际上最突出的公共卫生安全问题之一，其中食源性致病菌(如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌等)是食品安全的重要影响因素。多种致病菌相互混合存在于食品中，且数量差异较大，难以分离，检测困难。已有检测手段包括分离培养鉴定、聚合酶链式反应法、酶联免疫吸附法、质谱法等，这些检测方法各自具有特色和优势，但在实际样品的快速检测过程中仍然存在这样或那样的局限：如耗时费力、灵敏度不高、分辨率低等。因此，为了提高食源性致病菌检测的精度和效率，建立更为有效的新型致病菌同步快速检测手段具有非常重要的学术价值和现实意义。

由于成本低廉，简单实用等优点，基于生物酶纳米材料的比色传感方法用于致病菌的快速检测引起人们的关注。该比色方法利用生物酶的催化活性，能催化底物产生显色反应来传感分子识别，但生物酶不稳定且价格贵，其灵敏度也有待提高。表面增强拉曼散射(SERS)因具有快速、高灵敏优势成为研究热点，SERS与抗体、磁分离等联用技术能够实现食源性致病菌检测，但仍存在纳米探针合成复杂费时且重复性低、抗体价格昂贵且容易失活、部分细菌信号较弱使得检测限较高等问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于适配体DNA调控的金纳米棒表面生长铂形成信号探针和纳米酶试剂并用于UV和SERS检测食源性致病菌的方法。通过该方法能够灵敏、准确且快速地检测出待测溶液中是否含有食源性致病菌。

为了实现上述目的，该方法包括以下步骤：

S1、将十六烷基三甲溴化铵溶液、氯金酸溶液和硼氢化钠溶液混合后进行第一反应，得到第一混合液；

S2、将步骤S1得到的所述第一混合液与十六烷基三甲溴化铵溶液、氯金酸溶液、硝酸银溶液和抗坏血酸溶液混合后进行第二反应，收集固体产物；将所述固体产物与水混合，得到第二混合液；

S3、将步骤S2得到的所述第二混合液与适配体DNA溶液、染料溶液、羟胺盐酸盐溶液和氯铂酸溶液混合后进行第三反应，得到用于检测食源性致病菌的SERS信号探针和纳米酶溶液；

S4、将含有纳米磁球的液体与食源性致病菌的抗体溶液混合，得到捕获探针溶液；

S5、将步骤S3得到的所述用于检测食源性致病菌的SERS信号探针和纳米酶溶液、步骤S4得到的捕获探针溶液和待检测溶液混合后进行测试反应，磁分离后得到食源性致病菌检测混合液；

S6、将步骤S5得到的所述食源性致病菌检测混合液进行SERS检测；

S7、将步骤S5得到的所述食源性致病菌检测混合液与TMB(3,3',5,5'-四甲基联苯胺)溶液、H₂O₂溶液和缓冲液混合，进行UV检测。

上述方法步骤S1中，所述第一混合液中，十六烷基三甲溴化铵、氯金酸和硼氢化钠的摩尔比依次为1000：(2-5)：(2-10)，具体可为1000：2：2、1000：5：5。