[发明专利]一种UV和SERS同时检测食源性致病菌的方法

权利要求书

1.一种UV和SERS同时检测食源性致病菌的方法，包括下述步骤：

S1、将十六烷基三甲溴化铵溶液、氯金酸溶液和硼氢化钠溶液混合后进行第一反应，得到第一混合液；

S2、将步骤S1得到的所述第一混合液与十六烷基三甲溴化铵溶液、氯金酸溶液、硝酸银溶液和抗坏血酸溶液混合后进行第二反应，收集固体产物；将所述固体产物与水混合，得到第二混合液；

S3、将步骤S2得到的所述第二混合液与适配体DNA溶液、染料溶液、羟胺盐酸盐溶液和氯铂酸溶液混合后进行第三反应，得到用于检测食源性致病菌的SERS信号探针和纳米酶溶液；

S4、将含有纳米磁球的液体与食源性致病菌的抗体溶液混合，得到捕获探针溶液；

S5、将步骤S3得到的所述用于检测食源性致病菌的SERS信号探针和纳米酶溶液、步骤S4得到的捕获探针溶液和待检测溶液混合后进行测试反应，磁分离后得到食源性致病菌检测混合液；

S6、将步骤S5得到的所述食源性致病菌检测混合液进行SERS检测；

S7、将步骤S5得到的所述食源性致病菌检测混合液与3,3',5,5'-四甲基联苯胺溶液、H₂O₂溶液和缓冲液混合，进行UV检测。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

所述步骤S1中，所述第一混合液中，十六烷基三甲溴化铵、氯金酸和硼氢化钠的摩尔比依次为1000：(2-5)：(2-10)；

所述第一反应的反应条件为：温度为25-27℃，时间为0.5-3h；

所述步骤S2中，所述十六烷基三甲溴化铵溶液、氯金酸溶液、硝酸银溶液、第一混合液体和抗坏血酸溶液的体积比为1000：(1-20)：(0.1-2.5)：(2-10)：(1-10)；

所述第二反应的反应条件为：温度为25-35℃，时间为0.5-3h；

所述固体产物和水的质量比为1：(20-1000)。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述步骤S3中，所述适配体DNA序列由调控生长的序列和识别菌的序列组成，其中调控生长的序列由10-30个A、T或A和T的混合序列组成，识别菌的序列根据所要检测的食源性致病菌的种类进行选取；

具体的，所述适配体DNA溶液中的DNA序列为如下1)-3)中任一种：

1)序列表中序列1：

5′-AAAAAAAAAAAAAAAATCCGTCACACCTGCTCTGTCTGCGAGCGGGGCGCGGGCCCGGCGGGGGATGGTGGTGTTGCTCCCGTAT-3′

2)序列表中序列2：5′-AAAAAAAAAAAAAAAGCAATGGTACGGTACTTCCTCGGCACGTTCTCAGTAGCGCTCGCTGGTCATCCCACAGCTACGTCAAAAGTGCACGCTACTTTGCTAA-3′

3)序列表中序列3：

5′-AAAAAAAAAAAAAAATATGGCGGCGTCACCCGACGGGGACTTGACATTATGACAG-3′；

所述第二混合液、适配体DNA溶液、染料溶液、羟胺盐酸盐溶液和氯铂酸溶液的体积比为100：(1-8)：(0.05-1)：(0.1-1.5)：(1-10)；

所述第三反应的条件为：温度为25-27℃，时间为1-4h；

所述步骤S4中，所述抗体为生物素标记的抗体；所述纳米磁球为链霉亲和素标记的纳米磁球；所述抗体和纳米磁球通过生物素-链霉亲和素结合；

所述含有纳米磁球的液体和食源性致病菌的抗体溶液的体积比为100：(2-5)；

所述含有纳米磁球的液体中的纳米磁球为磁珠、纳米Fe₃O₄和/或纳米Fe₂O₃；所述纳米磁球的粒径为100-500nm。