[发明专利]一种油茶籽粕液态发酵制备活性多肽的方法

权利要求书

1.一种油茶籽粕液态发酵制备活性多肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）菌种活化与扩大培养：将纳豆芽孢杆菌和干酪乳杆菌的菌种分别接种于LB固体培养基和MRS 固体培养基中，37℃培养24h使菌种活化；再从活化后的菌种斜面以无菌操作方式挑取2~3环菌种，转接于相应液体培养基中扩大培养，使菌体浓度达到10⁷~10⁸CFU/mL，制备成用于发酵的种子液；

2）液体发酵培养基制备：将油茶籽粕预处理后，按照以下配方制备发酵培养基：油茶籽粕100~150g/L，果糖5~15g/L，氯化钠6~14g/L，硫酸镁0.5~1.0g/L，硫酸锰0.02~0.06g/L，磷酸二氢钾3.5~6.5g/L，磷酸氢二钠0.8~2.0g/L，碳酸钙2.0~4.0g/L，聚乙二醇-200 0.8~1.2g/L，初始pH为6.5~7.0，并进行灭菌处理；

3）磁场辅助发酵培养：取液体发酵培养基同时接入纳豆芽孢杆菌和干酪乳杆菌的种子液，进行发酵培养，并在发酵培养全过程中施加低强度磁场；发酵温度为30~38℃，摇床转速为150~250r/min，发酵时间为24~48h；

4）发酵液处理：发酵结束后，发酵液经5000r/min离心10min，取上清液即为油茶籽多肽粗提液。

2.根据权利要求1所述的一种油茶籽粕液态发酵制备活性多肽的方法，其特征在于，步骤1）中，扩大培养的具体方法为：将纳豆芽孢杆菌转接于LB液体培养基中，在37℃、150~200r/min摇床培养12~18h；将干酪乳杆菌转接于MRS 液体培养中，在37℃、150~200r/min摇床培养18~24h。

3.根据权利要求1所述的一种油茶籽粕液态发酵制备活性多肽的方法，其特征在于，步骤2）中，油茶籽粕预处理的方法为：将机械压榨或低温冷榨油茶籽粕晾晒、烘干，用粉碎机粉碎，过60~80目筛网。

4.根据权利要求1所述的一种油茶籽粕液态发酵制备活性多肽的方法，其特征在于，步骤2）中，灭菌处理的条件为115℃灭菌20~30min。

5.根据权利要求1所述的一种油茶籽粕液态发酵制备活性多肽的方法，其特征在于，步骤3）中，纳豆芽孢杆菌和干酪乳杆菌的总接种量为8%~12%，接种比例为1:1。

6.根据权利要求1所述的一种油茶籽粕液态发酵制备活性多肽的方法，其特征在于，步骤3）中，发酵温度优选为34℃，摇床转速优选为200r/min，发酵时间优选为36h。

7.根据权利要求1所述的一种油茶籽粕液态发酵制备活性多肽的方法，其特征在于，步骤3）中，低强度磁场是指磁场强度为20~30kA/m的磁场。

8.根据权利要求1所述的一种油茶籽粕液态发酵制备活性多肽的方法，其特征在于，步骤4）中，油茶籽多肽粗提液还需经过滤、真空浓缩、冷冻干燥、筛分等步骤得到油茶籽多肽产品。