[发明专利]一种同时检测黄曲霉毒素B1和赭曲霉毒素A的比率电化学适配体传感器的制备方法

说明书

本发明属于电化学传感技术领域，涉及一种用于同时检测AFB1和OTA的比率电化学适配体传感器的制备方法；传感器通过在金电极上顺序组装AQ‑hDNA、Fc‑Apt1和MB‑Apt2而制备，目标物与适配体的结合引起Fc‑Apt1和MB‑Apt2从电极表面剥离，导致比率信号I_Fc/I_AQ和I_MB/I_AQ下降，实现分别量化和检测AFB1和OTA的目的；该传感器对AFB1的检测线性范围为10pg/mL‑3ng/mL，检出限为3.3pg/mL；对OTA的检测线性范围为30pg/mL‑10ng/mL，检出限为10.0pg/mL；同时检测2种物质，具有灵敏度高、选择性好、精准度高等特点。

技术领域

本发明属于电化学传感技术领域，涉及一种用于同时检测黄曲霉毒素B1和赭曲霉毒素A的比率电化学适配体传感器的制备方法。

背景技术

黄曲霉毒素B1(AFB1)和赭曲霉毒素A(OTA)是农产品在高温高湿条件下由特定真菌产生的具有致畸性、肾毒性和致癌性的真菌毒素。AFB1和OTA可通过受污染的食物和动物饲料进入食物链，对人类健康产生严重危害。国际癌症研究机构IARC已将AFB1划为1类致癌物(对人类具有强致癌性)，而OTA被划为2B类致癌物(对人类潜在致癌性)。由于多种真菌的同时存在，同一农产品，如发霉的小麦或玉米中，往往同时存在AFB1和OTA。真菌毒素的共存增加了它们被误食的可能，并且由于毒素间的协同作用，少量的摄入也可能会对人类造成很大的危害。因此，需要发展有效的检测技术来实现农产品中AFB1和OTA的同时检测分析。

目前针对AFB1和OTA的同时检测技术主要有高效液相色谱-质谱法、高效液相色谱-荧光法等，但这些检测技术存在仪器昂贵、操作复杂、耗时长等缺点，需要发展一种简便、快捷的检测手段。

电化学传感方法以灵敏度高、检测快、操作简单等优点，有望成为多种真菌毒素同时检测的一种很有前途的方法。目前，针对单一真菌毒素的电化学适配体传感器已经具有良好灵敏度和选择性，但其检测精准度还有待进一步提高。而基于比率策略的比率电化学适配体传感器，由于具有内部校正功能，可以大大提高电化学传感器的精准度。目前，还没有针对AFB1和OTA同时检测的比率电化学适配体传感器的研究报道。因此，开发一种可实现AFB1和OTA高灵敏、高精准同时检测的比率电化学适配体传感器具有重要研究意义。

发明内容

针对现有检测技术存在的问题，本发明利用AQ标记的互补发夹DNA、Fc标记的黄曲霉毒素B1适配体和MB标记的赭曲霉毒素A适配体在金电极上顺序组装以构建比率电化学适配体传感器，实现对黄曲霉毒素B1和赭曲霉毒素A的高灵敏、高精准同时检测。

一种用于同时检测黄曲霉毒素B1和赭曲霉毒素A的比率电化学适配体传感器的制备方法，包括以下步骤：

(1)将金电极AuE依次用不同粒径的三氧化二铝粉末打磨，并依次在乙醇和水中超声清洗，以清除表面残留，然后在硫酸溶液中使用循环伏安对电极进行电化学清洗；

(2)将蒽醌-2-羧酸标记的互补发夹DNA，记为AQ-hDNA，修饰到经步骤(1)处理的电极上，室温条件下存放一段时间，利用金-硫键将AQ-hDNA固定在金电极表面；

(3)将巯基己醇(MCH)修饰在步骤(2)处理过的电极上，室温条件下孵育一段时间，以封闭金的非特异性结合位点；

(4)将二茂铁标记的黄曲霉毒素B1适配体，记为Fc-Apt1，修饰在步骤(3)处理过的电极上，在一定温度条件下反应一段时间，利用其与hDNA的互补杂交将Fc-Apt1组装在电极上；

(5)将亚甲蓝标记的赭曲霉毒素A适配体，记为MB-Apt2，修饰在步骤(4)处理过的电极上，利用互补杂交进一步将MB-Apt2组装在电极上，得到比率电化学适配体传感器，记为Fc-Apt1MB-Apt2/MCH/AQ-hDNA/AuE。