[发明专利]一种简单高效的鲫鱼外周血白细胞分离方法在审
| 申请号： | 202010026427.4 | 申请日： | 2020-01-10 |
| 公开（公告）号： | CN111073851A | 公开（公告）日： | 2020-04-28 |
| 发明（设计）人： | 朱雷;孔祥会;蒋昕彧;张杰;裴超;李莉 | 申请（专利权）人： | 河南师范大学 |
| 主分类号： | C12N5/078 | 分类号： | C12N5/078 |
| 代理公司： | 新乡市平原智汇知识产权代理事务所(普通合伙) 41139 | 代理人： | 路宽 |
| 地址： | 453007 河*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 简单 高效 鲫鱼 外周血 白细胞 分离 方法 | ||
1.一种简单高效的鲫鱼外周血白细胞分离方法，其特征在于具体过程为：
步骤S1：用酒精棉擦拭鲫鱼尾部消毒，使用含有5-6mL预冷抗凝剂的注射器从鲫鱼尾静脉抽取1mL血液，其中抗凝剂为含3-5g/mL BSA和15-20IU/mL Heparin的1640细胞培养基，配制好后于4℃预冷；
步骤S2：将步骤S1得到的稀释血液在4℃、50-150g离心条件下水平离心10-20min，离心结束后用移液枪将上清移至干净离心管中；
步骤S3：使用无菌胎牛血清润洗10mL无菌离心管，润洗后的离心管在试管架上静置1-3min，使用移液枪去除管底多余胎牛血清，向试管中加入3-5mL 1.080-1.085g/mL的percoll分离液；
步骤S4：取3-5mL步骤S2中得到的上清加至步骤S3中制备的percoll分离液上方，在4℃，800-900g离心条件下水平离心20-30min，使用1mL注射器从中间层吸取白细胞溶液，将白细胞溶液置于1.5mL无菌离心管，再加入等体积的磷酸盐缓冲液，然后在500-600g离心条件下离心5-10min，由此富集到高纯度的鲫鱼外周血白细胞。
2.根据权利要求1所述的简单高效的鲫鱼外周血白细胞分离方法，其特征在于：步骤S3中所述percoll分离液是由1.130g/mL percoll母液、1.5mol/L NaCl溶液和H2O配制而成的比重为1.080-1.085g/mL的percoll分离液。
3.根据权利要求1所述的简单高效的鲫鱼外周血白细胞分离方法，其特征在于：步骤S1中所述鲫鱼为淇河鲫。
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