[发明专利]用于制备奥利司他中间体的方法

说明书

本发明属于本发明属于生物制药和生物化工技术领域，具体地，涉及一种(R)‑β‑羟基十四烷酸酯类化合物的合成方法。该方法是将β‑羰基十四烷酸酯在酮还原酶、葡萄糖、葡萄糖脱氢酶、NADP⁺和缓冲液中反应得到(R)‑β‑羟基十四烷酸酯类。该方法为酶催化生物合成方法，操作简单，使用设备为常规设备，工艺环保，制得的产品纯度高、产率高、ee值高。

技术领域

本发明属于本发明属于生物制药和生物化工技术领域，具体地，涉及一种(R)-β-羟基十四烷酸酯类化合物的生物合成方法。

背景技术

肥胖症治疗药物主要分为两大类，即中枢神经作用减肥药和非中枢神经作用减肥药。中枢神经作用减肥药的减肥效果明显，但是副作用较大，临床应用受到较大限制。其中芬氟拉明由于会引起肺动脉高压和肥厚性心脏瓣膜病变于1997年退市。西布曲明由于可能增加严重心血管风险于2010年被国家食品药品监督管理局宣布停止生产、销售和使用。绿卡色林(locaserin，商品名Belviq)2012年6月由FDA批准上市，尚存在增加心瓣膜病和不良心血管事件的风险，临床应用的安全性还有待进一步验证。奥利司他(Orlistat)是第一个非中枢神经作用的减肥药物，且是目前全球唯一一种OTC减肥药物。自1998年上市以来，因疗效确切、安全性高，已成为减肥治疗的首选药物。奥利司他直接作用于胃肠道脂肪酶，抑制脂肪吸收效果显著，其靶点高度专一，对其他胃肠道酶没有影响，且无需通过全身吸收而发挥药效，其体内系统药物暴露量很低，主要副作用为胃肠道反应，安全性优异。奥利司他全球销售已超过20年，目前已在超过145个国家获得批准上市，其优异的疗效和安全性已被大量的临床应用验证。

奥利司他的市场需求量大，而找寻高效的奥利司他及其中间物的合成方法是极其重要的。而(R)-β-羟基十四烷酸酯是合成药物奥利司他的重要中间体，该中间体的光学纯度极为关键。如何高效的获得光学纯的(R)-β-羟基十四烷酸酯呢？

如中国专利CN101538285B报道了一种利用制备的(R)-金属催化剂[(R)-Ru(MeOBIPHEP)Cl2]2·NEt3催化不对称氢化反应，但该化学催化反应需要在强酸且60bar高压条件下反应才能得到ee值98.5％的产品。此类方法的不足之处在于：1)需要使用昂贵的(R)-配体与贵金属催化剂；2)催化剂需要现做现用，工艺稳定性难以保证；3)需要高压氢化设备；4)需要耐酸设备；5)反应控制得不好会影响ee值。针对上述缺点，我们用生物酶法进行系统的改进，解决奥利司他关键中间体的规模化生产。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种制备奥利司他中间体的生物酶，该生物酶能够有效地作用底物β-羰基十四烷酸酯。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：

用于制备奥利司他中间体(终物)的生物酶，所述生物酶作用的底物为β-羰基十四烷酸酯(原料)，结构式如I所示；所述奥利司他中间体为(R)-β-羟基十四烷酸酯，结构式如II所示；结构式I中的R指含有1-3个碳原子的饱和烷基，结构式II中R指含有1-3个碳原子的饱和烷基。

所述生物酶为酮还原酶，所述生物酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示及其同源性大于90％的氨基酸序列，来源于Singulisphaera acidiphila，NCBI数据库中的编码为WP_015245403.1，属于短链脱氢酶家族；和/或如SEQ ID N0:2所示及其同源性大于90％的氨基酸序列，来源于Sphingomonas echinoides，NCBI数据库中的编码为WP_010403640.1，属于短链脱氢酶家族。我们惊奇的发现，天然的或者经过基因/蛋白工程改造后的所述生物酶对所述底物有很好的催化作用，并得到光学纯度高的所述终物。当同一性/同源性≥90％的生物酶，我们希望视为等同侵权。

进一步，所述生物酶为酶粉和/或酶液和/或固定化酶。