[发明专利]用于制备奥利司他中间体的方法

权利要求书

1.一种生物酶在制备奥利司他中间体中的用途，其特征在于，所述生物酶作用的底物为β-羰基十四烷酸酯，结构式如I所示,所述奥利司他中间体为(R)-β-羟基十四烷酸酯，结构式如II所示,结构式I中的R指含有1-3个碳原子的饱和烷基，结构式II中R指含有1-3个碳原子的饱和烷基；结构式I中的R为甲基、乙基、正丙基或异丙基中任一种，结构式II中的R为甲基、乙基、正丙基或异丙基中任一种；

所述生物酶为酮还原酶，所述生物酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:1或如SEQ ID NO:2所示。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述生物酶为酶粉和/或酶液和/或固定化酶。

3.一种含有生物酶和底物的组合物，其特征在于，所述底物为β-羰基十四烷酸酯，结构式如I所示；所述生物酶为酮还原酶，所述生物酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:1或如SEQ IDNO:2所示；所述生物酶与所述底物的重量比为1:1.1-150；结构式I中的R为甲基、乙基、正丙基或异丙基中任一种；

4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述生物酶与所述底物的重量比为1:20、1：30、1：40、1：50、1：60、1：70、1：80、1：90、1：100、1：110、1：120、1：130、1：140或1：150。

5.含有权利要求3-4任一所述的组合物的反应体系，其特征在于，所述反应体系由I所示的底物、所述生物酶、葡萄糖，葡萄糖脱氢酶、NADP⁺和缓冲液组成，所述葡萄糖脱氢酶的序列如SEQ ID NO:3所示；结构式I中的R为甲基、乙基、正丙基或异丙基中任一种，

6.根据权利要求5所述的反应体系，其特征在于，所述反应体系的pH值为6.0-8.0。

7.根据权利要求5所述的反应体系，其特征在于，所述缓冲溶液为PBS缓冲液或Tris-HCl缓冲液。

8.根据权利要求5所述的反应体系，其特征在于，所述底物的浓度为20g/L-150g/L。

9.根据权利要求5所述的反应体系，其特征在于，所述NADP⁺的浓度为0.1-0.5g/L。

10.根据权利要求5所述的反应体系，其特征在于，化合物I与所述葡萄糖的摩尔比为1:1.2-4。

11.根据权利要求5所述的反应体系，其特征在于，所述缓冲液的浓度为0.01-0.5mol/L。

12.根据权利要求5所述的反应体系，其特征在于，所述反应体系的反应时间不超过15小时，得反应液。

13.基于权利要求5-12中任一项所述的反应体系制备奥利司他中间体的方法，其特征在于，将所述反应体系在20-40℃条件下搅拌反应，得所述奥利司他中间体的反应液，所述奥利司他中间体的中间体为(R)-β-羟基十四烷酸酯，结构式如II所示，结构式II中的R为甲基、乙基、正丙基或异丙基中任一种，

14.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，用NaOH水溶液作为pH值调节剂。

15.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，所述反应时间不超过15小时。

16.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，在所得反应液中用溶剂萃取所述奥利司他中间体。

17.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，所述溶剂为无水乙醇或乙酸乙酯。

18.根据权利要求17所述的方法，所得萃取物进行减压浓缩，并降温结晶，白色结晶固体即化合物II，结构式II中的R为甲基、乙基、正丙基或异丙基中任一种，