[发明专利]一种鲤冠状病毒TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测引物及应用

说明书

本发明属于病毒检测领域，具体公开了一种鲤冠状病毒TaqMan实时荧光定量RT‑PCR检测引物和探针及应用，发明人首次从鲤鱼中分离出了一种鲤冠状病毒，该病毒为鲤冠状病毒（Cyprinid Nidovirus）HL39，针对该病毒序列设计引物和探针：正向引物F：5'‑TTGCGACCCAAAGACGGTTATT‑3'，反向引物R：5'‑CGGTGGTTGAGAGCTTGTAG‑3'；荧光探针为P：5'‑FAM‑ACCTCTTACACTCTGCCCCTTTACCT‑TAMRA‑3'。可对鲤冠状病毒进行定量检测，该引物的特异性好，灵敏度高。

技术领域

本发明属于病毒分子检测技术领域，具体涉及一种鲤冠状病毒TaqMan实时荧光定量R T-PCR检测引物及应用。

技术背景

套式病毒目(Nidovirales)于1996年首次由国际病毒分类委员会(InternationalCommitt ee on Taxonomy of Viruses,ICTV)提出，该目病毒宿主广泛，可引起哺乳动物、鸟类、爬行动物、鱼虾等水生动物多种重大疾病。套式病毒目冠状病毒科是一类线形单股正链RNA病毒，最早于1937年从鸡身上分离出来，Almeida等对这些病毒进行了形态学研究，电子显微镜观察发现这些病毒的包膜上有形似日冕的棘突，故提出命名这类病毒为冠状病毒^[1]。1975年，国际病毒命名和分类委员会正式命名了冠状病毒科。2002-2003年期间，自我国局部地区发生的非典型肺炎，即由冠状病毒属的严重急性呼吸综合征病毒(SARS-CoV)引起，世界上有30多个国家和地区相继报道出现病例，病死率超过10％。2012年，中东地区开始出现新型冠状病毒，病死率超过50％，引起了世界范围的广泛关注，造成社会对冠状病毒的恐慌。因此，对冠状病毒进行深入研究具有重要意义。

2018年ICTV调整了套式病毒目的分类，新增了Abyssoviridae、Medioniviridae、Monon iviridae、Euroniviridae和Tobaniviridae等5个病毒科，其中在Tobaniviridae科下新增Oncots havirus属。2017年，申请人发表了鲫冠状病毒的相关研究成果，目前鲤冠状病毒(Cyprinid Nidovirus,CyNV)尚无公开报道，更也无有效的检测方法。

申请人首次从鲤鱼病变组织中分离出一株鲤冠状病毒，针对该病毒，设计了TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测引物，从而实现鲤冠状病毒的快速、精确检测。

发明内容

本发明的目的在于提供一种鲤冠状病毒HL39 TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测引物，所述的引物为：F：5'-TTGCGACCCAAAGACGGTTATT-3'和R：5'-CGGTGGTTGAGAGCTTGTAG-3'，所述病毒的保藏编号为CCTCC NO：V201988。

本发明的另一个目的在于提供一种鲤冠状病毒HL39 TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测引物在制备鲤冠状病毒检测试剂盒中的应用。

本发明的最后一个目的在于提供了一种鲤冠状病毒HL39 TaqMan实时荧光定量RT-PCR的阳性对照，所述的阳性对照是将SEQ ID NO.2所示序列插入pGEM-T载体中获得。

为了达到上述目的，本发明采取以下技术措施：

一种鲤冠状病毒HL39 TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测引物，所述的引物为：F：5'-TTGCGACCCAAAGACGGTTATT-3'和R：5'-CGGTGGTTGAGAGCTTGTAG-3'，所述病毒的保藏编号为CCTCC NO：V201988。

一种鲤冠状病毒HL39 TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测引物在制备鲤冠状病毒检测试剂盒中的应用；

以上所述的应用中，优选的，所述的鲤冠状病毒HL39的检测试剂盒包括：