[发明专利]检测位于生物全血中血细胞外侧的至少一种核酸的体外方法以及用于该目的的装置和试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测位于生物全血中血细胞外侧的至少一种核酸的体外方法，其包括以下步骤：

a)提供与至少一个引物对一起适合进行等温扩增反应的反应混合物，其中所述反应混合物包含至少一个引物对，所述至少一个引物对适于将存在于全血中的至少一种核酸扩增；或将至少一个这样的引物对加入到所述反应混合物中；

b)将生物全血加入到所述反应混合物中；

c)在≤45℃的温度下进行等温扩增反应；和

d)借助至少一种检测试剂检测DNA，其中所述检测在步骤c)期间或步骤c)之后进行，

其特征在于，所述反应混合物适于防止包含在所述生物全血中的血细胞裂解。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述反应混合物

i)与所述全血形成液体混合物，所述液体混合物与血细胞基本上等渗；和/或

ii)与所述全血形成液体混合物，所述液体混合物具有基本上对应于血细胞的渗透压的渗透压，优选渗透压为230mosmol/kg至350mosmol/kg、优选260mosmol/kg至320mosmol/kg、特别优选270mosmol/kg至310mosmol/kg、特别是280mosmol/kg至300mosmol/kg；和/或

iii)不包含适于进行裂解血细胞的任何表面活性剂，优选不包含适于进行裂解血细胞的物质或物质混合物。

3.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述检测试剂不适于通过所述全血中包含的血细胞的细胞膜。

4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述检测试剂选自荧光探针、结合DNA的染料分子、用于检测焦磷酸盐的试剂以及它们的组合，其中优选地

i)所述荧光探针包含或组成为寡核苷酸，所述寡核苷酸包含或组成为：猝灭剂、荧光团和存在于所述猝灭剂与所述荧光团之间的DNA序列，其中所述DNA序列适于被核酸内切酶或核酸外切酶切割，所述DNA序列优选为DHF或AP DNA序列；和/或

ii)结合DNA的染料分子选自EVAGreen、SYBR Green、Syto染料、TOPO染料以及它们的组合；和/或

iii)用于检测焦磷酸盐的试剂为镁盐。

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，DNA的检测通过检测单元进行，其中所述检测单元优选地选自吸收测量装置、荧光测量装置、浊度计、照相机、手机以及它们的组合。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，扩增DNA的量通过评价单元进行量化，其中所述评价单元优选地与检测单元通信连接。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，引物对中的至少一个引物、任选地引物对中的两个引物适于结合生物DNA中的重复DNA序列，优选地结合选自LINE序列、SINE序列和ALU序列的重复序列。

8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，引物对中的至少一个引物、任选地引物对的两个引物适于结合生物DNA中的DNA序列，所述DNA序列存在于生物患有疾病开始、期间或之后和/或过度肌肉劳损的开始、期间或之后的血液循环中。

9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，在步骤d)期间或之后扩增DNA的情况下，得出存在疾病和/或过度肌肉劳损的结论，其中所述疾病特别选自炎症、癌症、自身免疫性疾病、冠状动脉、中风、败血症、染色体畸变、基因拷贝数的变化、基因突变以及它们的组合。