[发明专利]荧光发生核酸分子以及荧光标记靶RNA的方法

说明书

本发明提供一种能够在细胞内特别是哺乳类的活细胞内使mRNA可视化的荧光发生RNA以及利用该荧光发生RNA的荧光标记靶RNA的方法。本发明提供一种荧光发生核酸分子，其特征在于，包含经由接头序列连接有2个以上的荧光分子结合区的碱基序列，所述荧光分子结合区在支架序列中插入有1个以上的荧光分子结合适体序列。

技术领域

本发明涉及一种用于荧光标记RNA的荧光发生核酸分子(发荧光的核酸分子)、以及使用该荧光发生核酸分子的荧光标记靶RNA的方法。

本申请基于2018年12月3日在日本申请的日本特愿2018-226743号主张优先权，将其内容引用至本文中。

背景技术

为了更好地理解如何在mRNA水平控制基因表达，强烈要求建立一种使活细胞的mRNA的时空动态视觉化的方法。在标靶mRNA上添加MS2或PP713等RNA茎环的标签，并招募与荧光分子融合后的蛋白质的方法是常用于使活细胞内的mRNA可视化的方法。该技术被用于追踪细胞质内的mRNA的活动(例如，参见非专利文献1)或用于使细胞核内新生的mRNA可视化(例如，参见非专利文献2)。但是，针对添加标签后的mRNA，在使细胞内的mRNA分布的动态可视化或测定表达水平时，未结合的荧光蛋白质较高的背景经常导致难以解释结果。

作为使活细胞内的mRNA视觉化的方法，可列举使用碱基序列依赖性地与特定的靶分子结合的RNA适体的方法作为候选。某种RNA适体能够通过与荧光性的低分子化合物结合来增强其荧光(例如，参见非专利文献3及4)。这样的RNA适体也被称为荧光发生RNA(fluorogenic RNA)。作为荧光发生RNA，具有例如：与GFP(Green fluorescent protein)的荧光团的类似物DFHBI(3,5-二氟-4-羟基亚苄基咪唑啉酮)家族的低分子的荧光分子结合的Spinach或Broccoli以及它们的衍生物(例如，参见非专利文献5、专利文献1)。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：美国专利第9,664,676号说明书

非专利文献

非专利文献1：Wu et al.,Science 2016,vol.352,p.1430-1435.

非专利文献2：Tyagi,Nature Methods,2009,vol.6,p.331-338.

非专利文献3：Paige et al.,Science,2011,vol.333,p.642-646.

非专利文献4：Filonov et al.,Journal of the American Chemical Society,2014,vol.136,p.16299-16308.

非专利文献5：Filonov et al.,Current Protocols in Chemical Biology,2017,vol.8(1),p.1-28.

非专利文献6：Ketterer et al.,Nucleic Acids Research,2015,vol.43,p.9564-9572.

非专利文献7：Autour et al.,Nucleic Acids Research,2016,vol.44,p.2491-2500.

非专利文献8：Zou et al.,Journal of Molecular Evolution,2015,vol.81,p.172-178.

非专利文献9：Ageely et al.,ACS Chemical Biology,2016,vol.11,p.2398-2406.

非专利文献10：Filonov et al.,ChemistryBiology,2015,vol.22,p.649-660.

非专利文献11：Filonov et al.,Nature Biotechnology,2011,vol.29,p.757-761.