[发明专利]用于DNA、特别是细胞游离DNA的表观遗传学分析的方法

权利要求书

1.一种用于将细胞游离DNA中的氧化的5-甲基胞嘧啶残基转化为二氢尿嘧啶残基的方法，包括使含有选自5-羧甲基胞嘧啶、5-甲酰基胞嘧啶及其组合的至少一种氧化的5-甲基胞嘧啶残基的细胞游离DNA与有机硼烷接触，所述有机硼烷有效地使所述至少一种氧化的5-甲基胞嘧啶残基还原、脱氨基和脱羧基或脱甲酰基，从而提供二氢尿嘧啶残基代替它。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述至少一种氧化的5-甲基胞嘧啶残基包含5-羧甲基胞嘧啶。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述至少一种氧化的5-甲基胞嘧啶残基包含5-甲酰基胞嘧啶。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述至少一种氧化的5-甲基胞嘧啶残基包含5-羧甲基胞嘧啶和5-甲酰基胞嘧啶的组合。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述有机硼烷包含硼烷与选自氮杂环和叔胺的含氮化合物的络合物。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述有机硼烷包含硼烷和氮杂环的络合物。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述氮杂环包含任选经1-4个低级烷基取代的吡啶。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述氮杂环包含吡啶、2-甲基吡啶或5-乙基-2-甲基吡啶。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述氮杂环包含2-甲基吡啶，并且所述有机硼烷是2-甲基吡啶硼烷。

10.根据权利要求5所述的方法，其中所述有机硼烷包含硼烷和叔胺的络合物。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述叔胺选自三乙胺和三(叔丁基)胺。

12.根据权利要求1所述的方法，其中还原、脱氨基和脱羧基在不分离任何中间体的情况下进行。

13.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法在不存在亚硫酸氢盐的情况下进行。

14.一种反应混合物，其包含：

(a)含有选自5-羧甲基胞嘧啶、5-甲酰基胞嘧啶及其组合的至少一种氧化的5-甲基胞嘧啶残基的细胞游离DNA样品；和

(b)有机硼烷，所述有机硼烷有效地使所述至少一种氧化的5-甲基胞嘧啶残基还原、脱氨基和脱羧基或脱甲酰基。

15.根据权利要求14所述的混合物，其中所述至少一种氧化的5-甲基胞嘧啶残基包含5-羧甲基胞嘧啶。

16.根据权利要求14所述的混合物，其中所述至少一种氧化的5-甲基胞嘧啶残基包含5-甲酰基胞嘧啶。

17.根据权利要求14所述的混合物，其中所述至少一种氧化的5-甲基胞嘧啶残基包含5-羧甲基胞嘧啶和5-甲酰基胞嘧啶的组合。

18.根据权利要求15至17中任一项所述的混合物，其中所述有机硼烷包含硼烷与选自氮杂环和叔胺的含氮化合物的络合物。

19.根据权利要求18所述的混合物，其中所述有机硼烷包含硼烷和氮杂环的络合物。

20.根据权利要求19所述的混合物，其中所述氮杂环包含任选经1-4个低级烷基取代的吡啶。

21.根据权利要求20所述的混合物，其中所述氮杂环包括吡啶、2-甲基吡啶或5-乙基-2-甲基吡啶。