[发明专利]一种靶向序列捕获及PCR建库方法

权利要求书

1.一种靶基因序列捕获及PCR建库方法，包括以下步骤：

1)根据需要捕获的靶基因区域设计特异性引物，特异性引物的5’端含有第一核酸序列；

2)使用转座酶复合物对基因组DNA、互补DNA进行片段化，所述转座酶复合物由第二核酸序列、转座酶识别序列与转座酶组成；

3)将上述片段化的DNA进行等量pooling，均一化样本捕获建库；

4)锚定多重PCR，对上述已pooling的样本进行多重PCR，捕获和扩增靶基因序列；

5)PCR建库：通过PCR使所述靶基因序列添加完整的测序接头与二级Barcode，形成NGS文库；所述第一核酸序列为部分测序接头序列，该序列为通用序列，如illumina平台则用P7端部分接头；如MGISEQ平台则用部分MGIAd_barcode序列；如IonTorrent平台则用部分A端接头序列；所述MGISEQ平台，第一核酸序列可用，但不限于：5’-AGACCGCTTGGCCTCCGACTT-3’；步骤2)所述转座酶复合物的第二核酸序列包括通用引物、一级Barcode和UID标签序列。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，通用序列为一端测序接头的部分序列，如illumina平台则用P5端部分接头，如MGISEQ平台则用部分MGIAd_Bottom序列，如IonTorrent平台则用部分P端接头序列；所述通用序列3’端含有一级Barcode和UID标签序列，所述一级barcode由6-12个序列已知的N碱基组成，所述UID标签序列由6-15个序列未知的N碱基组成；所述MGISEQ测序平台，第二核酸序列的核苷酸序列如下：

5'-CGACATGGCTACGATCCGACTTNNNNNNNNNNNNNNNNNNAGATGTGTATAAGAGACAG-3’。

3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤2)所述转座酶识别序列核苷酸序列为：

5'PHO-CTGTCTCTTATACACATCT-3’。

4.根据权利要求1或2所述方法，其特征在于，所述转座酶为Tn5转座酶或具有相似功能的转座酶。

5.根据权利要求4所述方法，其特征在于，所述转座酶为Tn5转座酶。

6.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤4)所述多重PCR扩增体系：

7.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤4)所述多重PCR扩增程序：

8.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤5)所述PCR扩增体系：

9.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤5)所述PCR扩增程序：