[发明专利]一种猕猴桃溃疡病菌株变型快速鉴定方法

权利要求书

1.一种猕猴桃溃疡病菌株变型快速鉴定方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

步骤1、菌株DNA提取

获取待测菌株的DNA

步骤2、制备多对引物对

所述多对引物对具体为：

Psa F：5’-CAGAGGCGCTAACGAGGAAA-3’SEQ ID NO.1

Psa R：5’-CGAGCATACATCAACAGGTCA-3’SEQ ID NO.2

Er F：5’-TGGTGATCGTCTGGATGTGT-3’SEQ ID NO.3

Er R：5’-ATTATGCTCCTGGCTCATGG-3’SEQ ID NO.4

Ch F：5’-GGAGTTCCAGCAACTGACG-3’SEQ ID NO.5

Ch R：5’-CGCTCAAGATCCTTTTCCAT-3’SEQ ID NO.6

JK F：5’-AGCAACGGTGGTTTGTTTTC-3’SEQ ID NO.7

JK R：5’-AAATGTTTGCCAGCCAAGTC-3’SEQ ID NO.8

步骤2、M-PCR扩增

利用步骤2提供的多对引物对对步骤1制备的菌株DNA进行M-PCR扩增，获得扩增产物

步骤3、鉴定

若扩增产物包含311bp扩增子，则待测菌株为丁香假单胞菌猕猴桃致病种Psa，否则为丁香假单胞菌非猕猴桃致病种；

扩增产物包含311bp扩增子同时包含254bp扩增子，则待测菌株为Psa日本/韩国变型；

扩增产物包含311bp扩增子同时包含733bp扩增子，则待测菌株为Psa欧洲变型；

扩增产物包含311bp扩增子同时包含609bp扩增子，则待测菌株为中国/新西兰变型。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2中M-PCR扩增体系为：反应组分总体积50μL，含有25μL GoTaq无色预混液2X，1μL模板DNA，0.30μM Psa F/Psa R引物，0.80μM欧洲菌株引物Er F/Er R，0.60μM日韩菌株引物JK F/JK R和中国菌株引物Ch F/Ch R，加去离子无菌水到最终体积。C1000梯度热循环基因扩增仪进行扩增，优化反应条件为：95℃初始变性10分钟；95℃持续30秒，连续变性40个循环，60℃下退火30秒，并在72℃持续75秒；最后72℃延伸5分钟。