[发明专利]一种解淀粉芽孢杆菌培养工艺方法

说明书

本发明涉及一种解淀粉芽孢杆菌培养工艺方法，所述解淀粉芽孢杆菌的培养以解淀粉芽孢杆菌为菌种，经种子培养基培养后接种到发酵培养基中进行发酵培养；所述种子培养基包括蛋白胨、酵母粉、氯化钠；所述发酵培养基包括玉米淀粉、可溶性淀粉、玉米浆、玉米面、蔗糖、碳酸钙、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、麸皮、豆粕。本发明提供一种解淀粉芽孢杆菌培养工艺方法，通过调控种子培养基与发酵培养基原料比，pH数值范畴、培育温度以及通气量比，使得培育出的芽孢杆菌数值最高达326亿/ml，远高于现阶段芽孢杆菌培育数量，并且培育工艺简单，选用的原料均廉价易得，利于工业化生产和芽孢杆菌相关产品的推广应用。

技术领域

本发明涉及植物疾病防治领域，具体是一种解淀粉芽孢杆菌培养工艺方法。

背景技术

近年来，随着公众对食品和环境中化学农药安全性的普遍关注以及危险性化学农药的禁用，促使人们寻求安全有效的植物病害控制途径，而利用有益微生物防治植物病害愈发受到重视。它是向被打破了的植物自然生态系中引入对植物有益的外源拮抗菌、或通过调节环境促使自然的有益微生物群体增长，并标线出生防活性，通过微生物之间的相互作用达到防病的目的。

解淀粉芽孢杆菌为芽孢杆菌属，是一种与枯草芽孢杆菌亲缘性很高的细菌，其在生长过程中可以产生一系列能够抑制真菌和细菌活性的代谢物。解淀粉芽孢杆菌作用机理主要是通过分泌抗菌物质，产生拮抗作用，营养与空间的竞争，进而诱导寄主产生抗性和促进植物生长。解淀粉芽孢杆菌通过产生低分子量抗生素以及抗菌蛋白或多肽等活性物质，抑制植物病原菌，并可作为根围细菌促进植物生长，在生物防治应用中对植物病原细菌、真菌、病毒、线虫的抑制起主要作用。目前的解淀粉芽孢杆菌通常用粉碎玉米粉或豆粕粉等农副产品作为发酵培养基的原料来降低生产成本，但采用此种方法发酵后的发酵液均量交底，菌株发酵的密度和产孢率较低，不利于工业化生产和相关产品的推广应用。

发明内容

本发明要解决的问题是针对现有技术中所存在的上述不足而提供一种解淀粉芽孢杆菌培养工艺方法用以解决现有解淀粉芽孢杆菌培养得到的菌株发酵密度和产孢率较低的问题。

为实现上述目的，本发明采用了如下的技术方案：一种解淀粉芽孢杆菌培养工艺方法，包括如下步骤：

1)电极标定，在发酵罐中用pH计标定采用pH6.86和pH4.01两种标准溶液进行标定，在饱和亚硫酸钠溶液下将发酵罐电极标定至0点；

2)种子培养基制备，将一定比例蛋白胨、酵母粉、氯化钠加入试管中，然后将试管置于漩涡仪的无菌离心管中充分振荡均匀，得到混合溶液，再以等量琼脂与混合溶液接种到种子培养皿中，在温度为37℃，转速为200转/min下振荡培养6h；

3)发酵培养基制备，称量一定比例可溶性淀粉、玉米淀粉、玉米浆、玉米面、蔗糖、碳酸钙、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、麸皮、豆粕后加入脱盐水置于发酵罐中，调节初始pH至7左右，在120℃高压蒸汽灭菌25min，将灭菌后的发酵罐对应安装并设置在培养温度在30-37℃，通气比0.8-1.8，转速800转/min，实罐灭菌结束通气稳定后，再利用电极标定法将发酵罐中溶氧标定至100％；

4)接种，将种子培养基中的溶液镜检，选取镜检种子液无杂菌浸染且菌种处于二分裂期时接种至发酵罐中；

5)培养，发酵罐中菌种接种完毕后对菌种进行发酵18-23h。

优选的，所述步骤3)中初始pH为6.84-7.27，培养温度在37℃，通气比为1.8；

优选的，所述步骤5)中菌种发酵时间为18.58-18.95h；

优选的，所述种子培养基按质量分数包括蛋白胨0.2％、酵母粉0.5％、氯化钠0-0.1％，余量为培养液。